Apolipoprotein B Antibody (Rabbit mAb) [E23K19]
目录号: F3743
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Human plasma, Lane 2: Human serum
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。
建议一抗稀释比: 1:10000
建议曝光 210s 以上。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。
建议一抗稀释比: 1:10000
建议曝光 210s 以上。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
实际分子量
|
|---|
|
516 kDa
516 kDa
|
| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Human plasma; Human serum; HepG2 cells |
|---|---|
| 阴性对照 | Caco-2 cells |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：250 mA, 180 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:10000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。(建议曝光时长 210s 以上)
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| Apolipoprotein B Antibody (Rabbit mAb) [E23K19] 可检测内源性 Apolipoprotein B 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 乳糜微粒，细胞质，低密度脂蛋白，脂滴，细胞外环境，极低密度脂蛋白 |
| Uniprot ID |
|---|
| P04114 |
| 克隆号 |
|---|
| E23K19 |
| 别名 |
|---|
| Apolipoprotein B-100, Apo B-100, APOB, Apolipoprotein B100 |
| 背景 |
|---|
| 载脂蛋白B是动脉粥样硬化脂蛋白中不可交换的结构性载脂蛋白，主要有两种亚型：ApoB-100由肝细胞合成，ApoB-48由肠细胞合成。两者均由APOB基因编码，但通过组织特异性mRNA编辑产生。ApoB-100支持极低密度脂蛋白（VLDL）在肝脏的组装，并作为LDL受体介导的LDL清除的主要配体；ApoB-48支持肠道乳糜微粒的形成和膳食脂肪的吸收。ApoB-100是一种非常大的两亲性蛋白，其一级结构包含较长的预测α螺旋和β折叠结构域，这些结构域交替结合表面磷脂单层和中性脂质核心。对其羧基末端区域的测序已鉴定出与受体结合和脂质相互作用相关的结构基序。生物物理分析表明，载脂蛋白B (ApoB) 具有构象灵活性，但锚定在三油酸甘油酯/水界面，在脂肪滴周围形成连续的环状结构，稳定新生脂蛋白颗粒，并在整个脂解过程中保持结合状态，从而维持从极低密度脂蛋白 (VLDL) 到中间密度脂蛋白 (IDL) 再到低密度脂蛋白 (LDL) 的颗粒完整性。在脂蛋白组装过程中，ApoB-100 与内质网中的微粒体甘油三酯转移蛋白 (MTP) 相互作用，获取核心甘油三酯和胆固醇酯，生成具有分泌能力的 VLDL，将甘油三酯从肝脏输送到外周组织；脂蛋白脂肪酶对 VLDL 甘油三酯的逐步水解生成 IDL，然后生成 LDL，此时 ApoB-100 仍然是 LDL 上唯一的载脂蛋白，引导 LDL 被肝细胞和其他细胞上的 LDL 受体识别，从而实现受体介导的内吞作用和细胞内胆固醇的递送。在肠道中，ApoB-48 由 APOB mRNA 位点特异性 C 到 U 编辑产生，是乳糜微粒组装和分泌所必需的，介导餐后膳食甘油三酯和脂溶性维生素向血液循环的转运。ApoB 编辑或分泌缺陷会导致脂肪吸收不良和低胆固醇血症。含 ApoB 的脂蛋白对脂质吸收和甘油三酯稳态至关重要，但血浆中 ApoB 水平过高与动脉粥样硬化的发生密切相关：综述研究强调，ApoB 决定了致动脉粥样硬化颗粒（低密度脂蛋白、脂蛋白(a)和富含甘油三酯的残粒）的数量；含 ApoB 的脂蛋白通过 ApoB 上特定的蛋白聚糖结合位点滞留在内皮下是斑块形成的必要起始事件；此外，修饰后的滞留 LDL 会释放生物活性脂质，从而引发血管壁的炎症和免疫反应。罕见的APOB错义突变会改变LDL受体结合域或脂质结合区，导致家族性高胆固醇血症，伴有LDL水平显著升高和缺血性心血管疾病风险增加；而其他变异则会降低ApoB分泌，产生低胆固醇血症，并起到预防动脉粥样硬化的作用。这表明ApoB的结构变化如何调节脂蛋白代谢和疾病易感性。在免疫层面，ApoB在动脉粥样硬化中发挥自身抗原的作用：大多数健康个体体内均可检测到ApoB特异性CD4+ T细胞，而冠状动脉疾病和心血管风险升高会促进ApoB特异性中央记忆T细胞的形成，这些细胞分泌促炎细胞因子IFN-γ和抗炎细胞因子IL-2和IL-10。这提示针对含ApoB的LDL的适应性免疫反应可以调节斑块形成过程中的全身炎症反应。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
