ARID1B/BAF250B Antibody [M24N11]

目录号: F4096

抗体应用：反应性：Human, Mouse

Lane 1: Jurkat, Lane 2: SH-SY5Y, Lane 3: Neuro-2a

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:200

抗体应用
WB, IP

反应性
Human, Mouse

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
250 kDa, 280 kDa

阳性对照	Jurkat cells; SH-SY5Y cells; Neuro-2a cells
阴性对照	Mia-PaCa-2 cells

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：250 mA, 180 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：250 mA, 180 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
ARID1B/BAF250B Antibody [M24N11] 可检测内源性 ARID1B/BAF250B 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞核

Uniprot ID
Q8NFD5

克隆号
M24N11

别名
AT-rich interactive domain-containing protein 1B; ARID domain-containing protein 1B; BAF250B; BRG1-binding protein hELD/OSA1; Osa homolog 2 (hOsa2); p250R; ARID1B; BAF250B; DAN15; KIAA1235; OSA2

背景
ARID1B，又称BAF250B，是BAF型SWI/SNF染色质重塑复合物的DNA结合亚基。这些复合物利用BRG1或BRM的ATPase活性来改变组蛋白-DNA相互作用，从而调节染色质的可及性并调控转录。ARID1B包含一个富含AT的相互作用域（ARID），该域能够识别特定序列的DNA，以及一个促进亚基组装的C端区域。ARID1B及其旁系同源物ARID1A在BAF复合物中互斥，从而形成具有特定功能的不同变体。ARID1B将BAF复合物募集到神经元基因启动子，并驱动活性依赖性的染色质重塑，这对于皮层发育过程中树突的生长、分支和突触的成熟至关重要。这包括上调c-Fos和Arc等早期基因的表达，这些基因对于细胞骨架动力学和正确的树突分支至关重要。海马和皮质锥体神经元中ARID1B的缺失会破坏这些过程，导致树突复杂性降低、棘突形态异常以及突触传递受损。ARID1B是神经元分化和可塑性的关键调控因子。这使其成为研究神经发育连接以及旨在恢复认知障碍中染色质动力学的潜在疗法的主要靶点。单倍体不足（通常由新发截断突变引起）会导致科芬-西里斯综合征，其特征为智力障碍、语言障碍和轻微的面部畸形，这表明该基因在大脑发育中对剂量敏感。

背景

ARID1B，又称BAF250B，是BAF型SWI/SNF染色质重塑复合物的DNA结合亚基。这些复合物利用BRG1或BRM的ATPase活性来改变组蛋白-DNA相互作用，从而调节染色质的可及性并调控转录。ARID1B包含一个富含AT的相互作用域（ARID），该域能够识别特定序列的DNA，以及一个促进亚基组装的C端区域。ARID1B及其旁系同源物ARID1A在BAF复合物中互斥，从而形成具有特定功能的不同变体。ARID1B将BAF复合物募集到神经元基因启动子，并驱动活性依赖性的染色质重塑，这对于皮层发育过程中树突的生长、分支和突触的成熟至关重要。这包括上调c-Fos和Arc等早期基因的表达，这些基因对于细胞骨架动力学和正确的树突分支至关重要。海马和皮质锥体神经元中ARID1B的缺失会破坏这些过程，导致树突复杂性降低、棘突形态异常以及突触传递受损。ARID1B是神经元分化和可塑性的关键调控因子。这使其成为研究神经发育连接以及旨在恢复认知障碍中染色质动力学的潜在疗法的主要靶点。单倍体不足（通常由新发截断突变引起）会导致科芬-西里斯综合征，其特征为智力障碍、语言障碍和轻微的面部畸形，这表明该基因在大脑发育中对剂量敏感。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26937011/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22426309/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%