HDAC7 Antibody (Rabbit mAb) [P6D17]
目录号: F8168
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Hela, Lane 2: K562
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
103 kDa
|
| 阳性对照 | Human fetal brain tissue; HeLa cells; K562 cells |
|---|---|
| 阴性对照 | A549 cells |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| HDAC7 Antibody (Rabbit mAb) [P6D17] 可检测内源性 HDAC7 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q8WUI4 |
| 克隆号 |
|---|
| P6D17 |
| 别名 |
|---|
| HDAC7A, HDAC7, Histone deacetylase 7, HD7, Histone deacetylase 7A, Protein deacetylase HDAC7, HD7a |
| 背景 |
|---|
| HDAC7 是一种 IIa 类组蛋白去乙酰化酶，可在细胞核和细胞质之间穿梭，并作为一种信号响应性转录共抑制因子发挥作用。它整合磷酸化信号与去乙酰化酶复合物的组装，从而调控多种组织（包括血管内皮细胞、心脏、骨骼肌细胞和免疫细胞）中的谱系决定、存活和应激适应。该蛋白包含一个富含丝氨酸残基的 N 端调控区，该区域可被激酶靶向，并包含 14-3-3 蛋白的结合位点；以及一个 C 端催化模块，该模块与 HDAC3、NCoR/SMRT 和其他共抑制因子结合，而非自身具有较高的去乙酰化酶活性。因此，其抑制作用主要依赖于该复合物募集到特定的转录因子和染色质区域。 PKD、CaMK 或 MARK 等激酶对 N 端保守丝氨酸的磷酸化促进了与 14-3-3 蛋白的结合和核输出，从而解除了 HDAC7 靶基因的抑制；而去磷酸化的 HDAC7 则在细胞核内积累，在那里它与 MEF2 和其他转录因子结合，募集 HDAC3 共抑制复合物，并强制组蛋白去乙酰化和基因沉默，从而建立了一个磷酸化开关，将上游 Ca²⁺/PKD 和应激通路与转录程序连接起来。在心血管发育和重塑过程中，HDAC7对于血管完整性和心脏生长控制至关重要：内皮细胞和心肌细胞中的核HDAC7抑制MEF2依赖性基因和其他促血管生成或肥大基因的表达；而刺激驱动的HDAC7磷酸化和核输出则允许MEF2激活、血管生成基因表达，并且正如最近的研究表明，通过解除对心肌扩张和再生所需细胞周期调节因子的抑制，促进心肌细胞增殖。在骨骼肌和成肌细胞中，HDAC7同样通过结合MEF2并维持肌肉特异性位点的去乙酰化、转录抑制的染色质状态来抑制分化；分化过程中HDAC7的核输出允许MEF2驱动的收缩和代谢基因表达，从而将IIa类HDAC的定位与肌源性进程联系起来。在多种实体瘤和血液恶性肿瘤中，HDAC7 的 mRNA 和蛋白质水平经常失调，泛癌分析表明，HDAC7 高表达与增殖增强、血管生成、上皮-间质转化特征以及化疗耐药性相关，部分原因是通过抑制肿瘤抑制因子和调节 STAT3 和 β-catenin 信号传导，部分原因是通过在特定情况下（例如乳腺癌干细胞样细胞）调节超级增强子连接的癌基因。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
