IRF-7 Antibody (Rabbit mAb) [C15N21]
目录号: F3030
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: A20, Lane 2: A20 (mIFN-α, 10 ng/ml, 24 h)
客户使用Selleck的IRF-7 Antibody (Rabbit mAb) [C15N21]发表文献1篇
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat, Hamster |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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54 kDa
45-60 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | A20 cells (mIFN-α, 10 ng/ml, 24 h); CHO cells (Universal Type I Interferon, 10 ng/ml, 24 h); YB2/0 cells (mIFN-α, 10 ng/ml, 24 h) |
|---|---|
| 阴性对照 | A20 cells; CHO cells; YB2/0 cells |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| IRF-7 Antibody (Rabbit mAb) [C15N21] 可检测内源性 IRF-7 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q92985 |
| 克隆号 |
|---|
| C15N21 |
| 别名 |
|---|
| Interferon regulatory factor 7; IRF-7; Irf7; OTTMUSP00000029373 |
| 背景 |
|---|
| 干扰素调节因子7 (IRF-7) 是IRF转录因子家族的成员，它能结合干扰素刺激启动子中的特定DNA元件，并将上游固有免疫受体信号整合到I型和III型干扰素基因的表达中，尤其是在浆细胞样树突状细胞和淋巴细胞谱系中，其表达在这些细胞中富集，并可被病毒、脂多糖和I型干扰素诱导。IRF-7的N端区域包含一个保守的螺旋-转角-螺旋DNA结合域，该结构域可识别干扰素调节元件；而C端调节区则含有多个富含丝氨酸的基序和相互作用表面，这些结构域控制着IRF-7的二聚化、核输入和辅助因子募集。上游激活始于模式识别受体，例如内体Toll样受体和胞质核酸传感器，它们通过衔接蛋白（包括MyD88或TRIF、TRAF家族泛素连接酶以及TANK结合激酶1或IKK相关激酶）传递信号，这些衔接蛋白可磷酸化IRF-7 C端聚集的丝氨酸残基。磷酸化的IRF-7与其他IRF形成同源二聚体或异源二聚体，其核定位信号发生构象变化，在细胞核内积累，并与染色质修饰共激活因子一起组装在干扰素启动子上，从而驱动广泛的抗病毒转录程序。这种转录输出通过正反馈环路增强干扰素信号传导，调节I型干扰素波的振幅和持续时间，并协调众多干扰素刺激基因的表达，这些基因调控病毒复制、抗原呈递和炎症介质的产生。多种翻译后修饰可精细调控IRF-7的活性：磷酸化标记与激活相关，K63连接的泛素化促进完全转录激活，而其他泛素连接或蛋白酶体靶向则限制IRF-7的丰度，防止干扰素过度释放。IRF-7还与NF-κB和AP-1通路在共同的靶启动子处相互作用，并参与EB病毒潜伏程序。在潜伏膜蛋白1的诱导和激活过程中，IRF-7将病毒致癌信号与干扰素相关的转录网络联系起来。在生理免疫中，IRF-7对于早期全身抗病毒防御至关重要，它塑造浆细胞样树突状细胞的功能，影响B细胞反应，并参与先天性和适应性免疫通讯的更广泛协调。 IRF-7 表达或活性失调会改变干扰素产生阈值，与以慢性 I 型干扰素特征为特征的自身免疫表型相关，并影响感染、癌症和其他炎症相关病理的易感性或进展，在这些病理中，干扰素平衡是组织结果的主要决定因素。 |
| 参考文献 |
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