POLDIP2 Antibody [N1K14]

目录号: F3409

抗体应用：反应性：Human

Lane 1: Hela, Lane 2: HepG2

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000 - 1:10000 IP1:40 FCM1:350

抗体应用
WB, IP

反应性
Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
42 kDa 38 kDa, 37 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

阳性对照	HAP1 cells; HeLa cells; HepG2 cells
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
POLDIP2 Antibody [N1K14] 可检测内源性 POLDIP2 总蛋白水平。

蛋白定位
线粒体，细胞核

Uniprot ID
Q9Y2S7

克隆号
N1K14

别名
PDIP38; POLDIP2; Polymerase delta-interacting protein 2; 38 kDa DNA polymerase delta interaction protein; p38

背景
POLDIP2（聚合酶δ相互作用蛋白2）是一种多功能蛋白，主要在心肌和骨骼肌中表达。其结构特征为紧凑的双结构域球状结构，富含β折叠，N端动态无结构区通过延伸的连接肽与刚性核心相连。刚性核心包含一个YccV样结构域和一个并列的DUF525结构域，二者共同形成一个中心通道。其链间环赋予其构象灵活性，促进与多种伴侣蛋白的相互作用。POLDIP2作为DNA聚合酶δ的必需辅助因子，通过与PCNA相互作用增强复制叉稳定性，并通过与催化结构域结合促进PrimPol的持续合成和氧化DNA损伤的无错修复。此外，它还与RAD51协同作用，协调碱基切除修复和同源重组，从而维持基因组完整性。 POLDIP2动态调控Nox4/p22^phox介导的活性氧（ROS）生成，这对于血管平滑肌细胞迁移过程中的黏着斑周转和细胞骨架重塑至关重要。POLDIP2通过抑制HIF-1α调控的缺氧条件下Clp蛋白酶介导的ACSM1降解来控制PDH和αKGDH复合物的脂酰化，从而维持氧化代谢。POLDIP2缺失会导致线粒体功能障碍和逆向代谢重编程，而其过表达则通过Pink1降解和抑制线粒体自噬促进糖尿病视网膜病变炎症。POLDIP2失调还与促进癌细胞增殖、通过内皮细胞Nox4过度激活导致心血管疾病以及通过影响细胞骨架导致病理性新生血管形成有关。

背景

POLDIP2（聚合酶δ相互作用蛋白2）是一种多功能蛋白，主要在心肌和骨骼肌中表达。其结构特征为紧凑的双结构域球状结构，富含β折叠，N端动态无结构区通过延伸的连接肽与刚性核心相连。刚性核心包含一个YccV样结构域和一个并列的DUF525结构域，二者共同形成一个中心通道。其链间环赋予其构象灵活性，促进与多种伴侣蛋白的相互作用。POLDIP2作为DNA聚合酶δ的必需辅助因子，通过与PCNA相互作用增强复制叉稳定性，并通过与催化结构域结合促进PrimPol的持续合成和氧化DNA损伤的无错修复。此外，它还与RAD51协同作用，协调碱基切除修复和同源重组，从而维持基因组完整性。 POLDIP2动态调控Nox4/p22^phox介导的活性氧（ROS）生成，这对于血管平滑肌细胞迁移过程中的黏着斑周转和细胞骨架重塑至关重要。POLDIP2通过抑制HIF-1α调控的缺氧条件下Clp蛋白酶介导的ACSM1降解来控制PDH和αKGDH复合物的脂酰化，从而维持氧化代谢。POLDIP2缺失会导致线粒体功能障碍和逆向代谢重编程，而其过表达则通过Pink1降解和抑制线粒体自噬促进糖尿病视网膜病变炎症。POLDIP2失调还与促进癌细胞增殖、通过内皮细胞Nox4过度激活导致心血管疾病以及通过影响细胞骨架导致病理性新生血管形成有关。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29434038/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33884680/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%