SCG10/Stathmin-2 Antibody [D11B18]

目录号: F4944

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例

抗体应用
IP, IHC

反应性
Human, Mouse, Rat

抗体类型
Mouse Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
˜20 kDa

阳性对照	Adult rat neocortex; Adult rat hippocampus; Cultured hippocampal neurons (9 DIV)
阴性对照

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
SCG10/Stathmin-2 Antibody [D11B18] 可检测内源性 SCG10/Stathmin-2 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞突起，细胞质，内体，高尔基体，内膜系统

Uniprot ID
Q93045

克隆号
D11B18

别名
Stathmin-2; Superior cervical ganglion-10 protein (Protein SCG10); Stmn2; Scg10; Scgn10

背景
SCG10（Stathmin-2，STMN2）是一种神经元富集的微管去稳定蛋白，属于stathmin家族，对轴突生长和再生至关重要。它包含一个N端调控结构域，该结构域具有四个关键磷酸化位点（Ser22、Ser25、Ser38和Ser63），这些位点可被JNK1、MAPK和PKA等激酶靶向。C端区域包含一个α螺旋状的stathmin样结构域，该结构域含有两个微管蛋白结合口袋，使SCG10能够以1:2的化学计量比螯合α/β-微管蛋白异二聚体。这种螯合作用可阻止纵向原丝的组装，从而抑制微管聚合。在去磷酸化状态下，SCG10 能以高亲和力（Kd ~0.3–1 μM）结合游离微管蛋白，通过捕获具有 GTP 酶活性的微管蛋白，使微管动力学向解聚方向转变，从而促进微管灾难性断裂。然而，SCG10 的磷酸化会引入负电荷并诱导构象变化，破坏其与微管蛋白的结合，从而释放微管蛋白异二聚体，促进微管生长。这种机制在轴突生长过程中稳定轴突微管。JNK1 介导的 Ser22/Thr22 磷酸化在皮层神经元迁移过程中尤为重要，它控制着神经元从多极形态向双极形态的转变，并调节径向迁移的速度。SCG10 在发育中的中枢神经系统神经元中表达最高，它通过与钙调蛋白结合介导 Ca²⁺ 依赖性微管重塑，促进生长锥动力学，并有助于损伤后的轴突再生。肌萎缩侧索硬化症/额颞叶痴呆症中TDP-43的缺失会导致STMN2转录本中出现隐蔽外显子插入，从而导致功能性SCG10蛋白的耗竭。这会引起轴突变性、神经肌肉接头回缩和运动障碍，而恢复全长STMN2的表达可以逆转这些表型。

背景

SCG10（Stathmin-2，STMN2）是一种神经元富集的微管去稳定蛋白，属于stathmin家族，对轴突生长和再生至关重要。它包含一个N端调控结构域，该结构域具有四个关键磷酸化位点（Ser22、Ser25、Ser38和Ser63），这些位点可被JNK1、MAPK和PKA等激酶靶向。C端区域包含一个α螺旋状的stathmin样结构域，该结构域含有两个微管蛋白结合口袋，使SCG10能够以1:2的化学计量比螯合α/β-微管蛋白异二聚体。这种螯合作用可阻止纵向原丝的组装，从而抑制微管聚合。在去磷酸化状态下，SCG10 能以高亲和力（Kd ~0.3–1 μM）结合游离微管蛋白，通过捕获具有 GTP 酶活性的微管蛋白，使微管动力学向解聚方向转变，从而促进微管灾难性断裂。然而，SCG10 的磷酸化会引入负电荷并诱导构象变化，破坏其与微管蛋白的结合，从而释放微管蛋白异二聚体，促进微管生长。这种机制在轴突生长过程中稳定轴突微管。JNK1 介导的 Ser22/Thr22 磷酸化在皮层神经元迁移过程中尤为重要，它控制着神经元从多极形态向双极形态的转变，并调节径向迁移的速度。SCG10 在发育中的中枢神经系统神经元中表达最高，它通过与钙调蛋白结合介导 Ca²⁺ 依赖性微管重塑，促进生长锥动力学，并有助于损伤后的轴突再生。肌萎缩侧索硬化症/额颞叶痴呆症中TDP-43的缺失会导致STMN2转录本中出现隐蔽外显子插入，从而导致功能性SCG10蛋白的耗竭。这会引起轴突变性、神经肌肉接头回缩和运动障碍，而恢复全长STMN2的表达可以逆转这些表型。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37236359/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39253877/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%