Human CD19+ Cell lsolation Kit
目录号: Q0004
本试剂盒需要分选柱
产品描述
产品介绍：
人CD19细胞分选试剂盒适用于从人PBMC、骨髓、淋巴组织或细胞培养物等来源中阳性分选或去除CD19+ B细胞。
应用范围：
● 阳性分选或去除表达人CD19抗原的细胞。
● 从外周血单个核细胞（PBMCs）、体液（如支气管灌洗液）或组织单细胞悬液（如淋巴组织和肿瘤组织）中分离或去除B细胞。
组分：
Anti-human CD19微珠：Anti-human CD19抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。
储存条件：
-20℃避光保存，避免反复冻融。
分选柱：
阳性分选：MS, LS, XS Columns
清除分选：LD, D Columns
背景信息：
CD19抗原作为B细胞谱系标志，从早期祖B细胞阶段到B细胞淋巴母细胞阶段均有表达，但随着B细胞成熟为浆细胞，其表达下调。CD19抗原还表达于大多数恶性B细胞和部分滤泡树突状细胞。
实验步骤
实验前准备
缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。
实验步骤
1. 细胞准备： 准备新鲜的PBMC或液氮冻存的PBMC，调整细胞密度为1×108 cells/mL。
2. CD19微珠标记：每107细胞中加入 10 µL CD19微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意： 分选更多细胞时，按比例增加CD19微珠用量（如分选5×107细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD19微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD19阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD19阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意： 每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6. （可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD19阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。
技术支持
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