Mouse CD45R+ Cell lsolation Kit
目录号: Q0008
本试剂盒需要分选柱
产品描述
产品介绍：
小鼠CD45R细胞分选试剂盒阳性分选或去除来自骨髓、淋巴结、脾脏等淋巴组织，或肠固有层、腹膜腔、肺等非淋巴组织的小鼠B细胞。
应用范围：
● 从小鼠淋巴结和腹膜腔分离B细胞以研究细胞因子表达和抗原呈递活性，或从脾脏分离以研究轻链基因重排和B细胞增殖。
● 结合CD90（Thy1.2）、CD4（L3T4）和CD8（Ly-2）分离未接触的巨噬细胞。
● 分离小鼠B细胞用于过继转移实验，以研究利什曼病小鼠模型。
组分：
CD45R微珠，鼠源：CD45R抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。
储存条件：
-20℃避光保存，避免反复冻融。
分选柱：
阳性分选：MS, LS, XS Columns
清除分选：LD, D Columns
背景信息：
CD45R抗原在B细胞系细胞的整个发育过程中均有表达，从早期祖B细胞阶段开始，并在终末分化为浆细胞时下调。CD45R也表达于浆细胞样树突状细胞。
实验步骤
实验前准备
缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。
实验步骤
1. 样本准备：
以小鼠脾脏为例:
a. 在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的 PBS 冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 ml 离心管中，500 g，离心5 min。
b. 离心完成后，弃上清，加入5 ml ACK 红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 ml PBS，500 g，离心5 min。
注意：红细胞裂解步骤可根据所用裂解液不同调整用量及时间。少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。
c. 离心完成后，弃上清，将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，继续以500 g，离心5 min。
d. 离心完成后，弃上清，将细胞重悬于分选 buffer 中，调整细胞密度为1×108 cells/ml。
2. CD45R微珠标记：每107细胞中加入 10 µL CD45R微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意：分选更多细胞时，按比例增加CD45R微珠用量（如分选5×107细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD45R微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD45R阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD45R阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意：每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6.（可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD45R阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。
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