Akt2 Rabbit mAb
目录号: F0218
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Lane 1: Hela
Lane 2: C6
Lane 3: Jurkat
Lane 4: JAR
Lane 5: NIH/3T3
Lane 6: A431
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 胞内体; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 60 kDa |
| 阳性对照 | Hela; C6; MEF (ART WT) |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤：
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Akt2 Rabbit mAb 用于检测内源性 Akt2 总的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P31751 |
| 克隆号 |
|---|
| P3J21 |
| 背景 |
|---|
Akt，也称为 PKB 或 Rac，在调节细胞存活和凋亡中发挥着关键作用。 AKT 存在三种亚型（AKT1、AKT2 和 AKT3），每种亚型具有不同的功能、特征和表达模式，具体取决于细胞类型。 AKT2 与癌症生物学的各个方面尤其相关，包括细胞代谢、增殖、存活、转移、血管生成和耐药性。 在多种癌症类型中观察到不同 AKT 同工型的表达升高，这使得它们成为癌症靶向治疗的有希望的靶标。 在非小细胞肺癌 (NSCLC) 中，肿瘤组织中 AKT2 表达上调，敲低 AKT2 表达可通过诱导细胞周期停滞来减弱细胞增殖。 在乳腺癌中，抑制 AKT2 活性可有效阻止非癌症干细胞 (non-CSC) 转化为上皮细胞，并削弱非 CSC 和 CSC（癌症干细胞）的侵袭和集落形成能力。 |
| 参考文献 |
|---|
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