Anti-Mitofusin 1 Rabbit Antibody [D5A17]

目录号: F3771

抗体应用：反应性：Mouse, Rat

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:30

抗体应用
WB, IP

反应性
Mouse, Rat

抗体类型
Rabbit

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
84 kDa 84 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

阳性对照	Mouse brain; Mouse heart; Rat brain; Rat heart; NIH/3T3; Neuro-2a; C2C12
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Anti-Mitofusin 1 Rabbit Antibody [D5A17] 可检测内源性 Mitofusin-1 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞质，内膜系统，线粒体，线粒体外膜

Uniprot ID
Q8IWA4

克隆号
D5A17

别名
Mitofusin-1, Transmembrane GTPase MFN1, Mfn1

背景
线粒体融合蛋白 1 (MFN1) 是位于线粒体外膜上的动力蛋白相关 GTPase 家族的关键成员，对线粒体融合至关重要，而线粒体融合是维持线粒体网络完整性、能量稳态和细胞存活的关键过程。MFN1 包含一个 N 端 GTPase 结构域，该结构域可实现 GTP 结合和水解；两个七肽重复序列区域 (HR1 和 HR2)，可形成卷曲螺旋结构，介导二聚化和相邻线粒体之间的连接；以及两个跨膜螺旋，将蛋白质锚定在外膜内。延伸的 HR2 有助于与相邻线粒体上的 MFN1 或 MFN2 直接相互作用，从而驱动高效融合。 MFN1与MFN2和OPA1密切协作，维持线粒体形态，稳定线粒体DNA (mtDNA)，调节ATP生成，支持凋亡途径，并使其在应激条件下进行代谢适应。它还促进线粒体自噬，防止功能障碍的线粒体积聚，对胚胎发生和神经元发育至关重要。MFN1的缺失或功能障碍会损害线粒体动力学，导致能量不足、神经退行性病变和代谢疾病。尽管MFN1突变的发生率低于MFN2，但其缺陷会加剧类似2A型腓骨肌萎缩症的神经病变、肌肉萎缩和神经炎症；在帕金森病、阿尔茨海默病和某些癌症等疾病中也观察到MFN1表达改变。

背景

线粒体融合蛋白 1 (MFN1) 是位于线粒体外膜上的动力蛋白相关 GTPase 家族的关键成员，对线粒体融合至关重要，而线粒体融合是维持线粒体网络完整性、能量稳态和细胞存活的关键过程。MFN1 包含一个 N 端 GTPase 结构域，该结构域可实现 GTP 结合和水解；两个七肽重复序列区域 (HR1 和 HR2)，可形成卷曲螺旋结构，介导二聚化和相邻线粒体之间的连接；以及两个跨膜螺旋，将蛋白质锚定在外膜内。延伸的 HR2 有助于与相邻线粒体上的 MFN1 或 MFN2 直接相互作用，从而驱动高效融合。 MFN1与MFN2和OPA1密切协作，维持线粒体形态，稳定线粒体DNA (mtDNA)，调节ATP生成，支持凋亡途径，并使其在应激条件下进行代谢适应。它还促进线粒体自噬，防止功能障碍的线粒体积聚，对胚胎发生和神经元发育至关重要。MFN1的缺失或功能障碍会损害线粒体动力学，导致能量不足、神经退行性病变和代谢疾病。尽管MFN1突变的发生率低于MFN2，但其缺陷会加剧类似2A型腓骨肌萎缩症的神经病变、肌肉萎缩和神经炎症；在帕金森病、阿尔茨海默病和某些癌症等疾病中也观察到MFN1表达改变。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30647902/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27920125/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

技术支持

在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。

* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%