Anti-SMARCC1/BAF155 Rabbit Antibody [E10L22]

目录号: F3789

抗体应用：反应性：Rat, Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

操作要点

WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。

使用信息

稀释比例
WB1:1000- 1:10000 IP1:10 - 1:100 IF1:100 FCM1:10 - 1:100

抗体应用
WB, IP, IF, FCM, ChIP

反应性
Rat, Human

抗体类型
Rabbit

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
123 kDa 112 kDa, 155 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

阳性对照	Rat testis; HeLa; HEK293; Jurkat; K562; 293T; MDA-MB-231
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

IF
实验步骤：标本制备 1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。 2. 室温固定细胞 15 分钟。 3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。 4. 继续进行免疫染色。免疫染色 1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。 2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。 3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。 4. 4°C 孵育过夜。 5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。 7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。 9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 23°C 避光保存。

实验步骤：

标本制备

1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。

注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

2. 室温固定细胞 15 分钟。

3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

4. 继续进行免疫染色。

免疫染色

1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。

2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。

3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。

4. 4°C 孵育过夜。

5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。

7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。

9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 23°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Anti-SMARCC1/BAF155 Rabbit Antibody [E10L22] 可检测内源性 SMARCC1/BAF155 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞质，细胞核

Uniprot ID
Q92922

克隆号
E10L22

别名
BAF155, SMARCC1, SWI/SNF complex subunit SMARCC1, BRG1-associated factor 155, SWI/SNF complex 155 kDa subunit, SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily C member 1

背景
mSWI/SNF，也称为BAF复合物，是一个ATP依赖性的染色质重塑系统，由31个不同基因编码的16个蛋白质亚基组成。这些亚基以各种组合组装成不同的复合物，并在关键的生物学过程中发挥特殊作用。一个普遍存在的核心成分是BAF155 (SMARCC1)，它可以以同源二聚体的形式存在，也可以与其旁系同源物BAF170 (SMARCC2)以异二聚体的形式存在。在干细胞中，BAF155是主要形式，而BAF170在细胞分化过程中变得更加丰富。BAF155的独特之处在于它是胚胎干细胞特异性SWI/SNF复合物(esBAF)和非经典BAF复合物(ncBAF)中唯一的共用亚基。该蛋白被认为是结直肠癌和前列腺癌的治疗靶点，而BAF155的突变与癌症预后不良相关。 SMARCC1基因位于3号染色体上，编码BAF155。作为SWI/SNF染色质重塑家族的成员，含SMARCC1的蛋白质具有解旋酶和ATP酶相关的功能，使其能够通过围绕靶基因重构染色质来调控转录。BAF155含有转录相关蛋白典型的亮氨酸拉链基序，并与BAZ1B、ING1、SIN3A、SMARCA2、SMARCA4和SMARCB1等多个蛋白相互作用。功能上，SMARCC1通过刺激复合物催化亚基的ATP酶活性来调节核小体结构，从而影响基因表达。它是神经祖细胞特异性BAF（npBAF）复合物和神经元特异性BAF（nBAF）复合物的组成部分。在神经发育过程中，神经元在退出细胞周期并成熟时，会从 npBAF 复合物转变为 nBAF 复合物。这种亚基转换将 npBAF 中的 ACTL6A/BAF53A 和 PHF10/BAF45A 替换为 nBAF 中的 ACTL6B/BAF53B 以及 DPF1/BAF45B 或 DPF3/BAF45C。npBAF 复合物支持神经干细胞的自我更新和增殖，而 nBAF 通常与 CREST 协同作用，调节与树突生长相关的基因的转录。

背景

mSWI/SNF，也称为BAF复合物，是一个ATP依赖性的染色质重塑系统，由31个不同基因编码的16个蛋白质亚基组成。这些亚基以各种组合组装成不同的复合物，并在关键的生物学过程中发挥特殊作用。一个普遍存在的核心成分是BAF155 (SMARCC1)，它可以以同源二聚体的形式存在，也可以与其旁系同源物BAF170 (SMARCC2)以异二聚体的形式存在。在干细胞中，BAF155是主要形式，而BAF170在细胞分化过程中变得更加丰富。BAF155的独特之处在于它是胚胎干细胞特异性SWI/SNF复合物(esBAF)和非经典BAF复合物(ncBAF)中唯一的共用亚基。该蛋白被认为是结直肠癌和前列腺癌的治疗靶点，而BAF155的突变与癌症预后不良相关。 SMARCC1基因位于3号染色体上，编码BAF155。作为SWI/SNF染色质重塑家族的成员，含SMARCC1的蛋白质具有解旋酶和ATP酶相关的功能，使其能够通过围绕靶基因重构染色质来调控转录。BAF155含有转录相关蛋白典型的亮氨酸拉链基序，并与BAZ1B、ING1、SIN3A、SMARCA2、SMARCA4和SMARCB1等多个蛋白相互作用。功能上，SMARCC1通过刺激复合物催化亚基的ATP酶活性来调节核小体结构，从而影响基因表达。它是神经祖细胞特异性BAF（npBAF）复合物和神经元特异性BAF（nBAF）复合物的组成部分。在神经发育过程中，神经元在退出细胞周期并成熟时，会从 npBAF 复合物转变为 nBAF 复合物。这种亚基转换将 npBAF 中的 ACTL6A/BAF53A 和 PHF10/BAF45A 替换为 nBAF 中的 ACTL6B/BAF53B 以及 DPF1/BAF45B 或 DPF3/BAF45C。npBAF 复合物支持神经干细胞的自我更新和增殖，而 nBAF 通常与 CREST 协同作用，调节与树突生长相关的基因的转录。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33953332/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19785031/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%