Atg4B Rabbit mAb

目录号: F1446

    • Lane 1: Jurkat
      Lane 2: HEPG2
    1/
    规格 价格 库存 购买数量
    20uL 790 现货
    50uL 1240 现货
    100uL 1990 现货
    100uL*2 3790 现货
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    操作要点

    蛋白定位:细胞质; 胞质囊泡; 内质网; 线粒体
    WB
    建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。

    使用信息

    稀释比例
    1:1000
    1:100
    抗体应用
    WB, IP
    抗体类型
    Rabbit
    反应性
    Human, Mouse, Rat
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
    储存条件(自收到货起)
    –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    48 Kda
    阳性对照 jurkat; HEPG2; A20; Ramos; RD; 293T (transfected with mAg4B)
    阴性对照

    样品处理数据示例

    样品 处理情况
    293T Transfection (mAg4B)
    点击查看更多样品数据

    *该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考:http://www.proteinatlas.org

    实验方法

    WB
    实验步骤:
     
    样品制备
    1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),低温匀浆。
    2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
    3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
    4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
    5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
    6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
     
    电泳分离
    1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
    2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
     
    转膜
    1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
    2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
    4.将蛋白电转移至 PVDF膜上(推荐采用 0.45 µm PVDF 膜)。 PVDF 膜孔径规格选择参照表
    湿转法参考条件:200 mA, 120 min。(电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
     
    封闭(可选)
    1. 电转移后,室温下用 TBS 洗膜 5 min;
    2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
    3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    抗体孵育
    1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:1000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
    2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
    3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
    4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    显色
    1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
    2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性

    Atg4B Rabbit mAb识别内源性总Atg4B蛋白。

    Uniprot ID
    Q9Y4P1
    克隆号
    N4F5
    背景

    自噬相关蛋白4B(ATG4B) 是自噬相关蛋白ATG4家族的成员,ATG4是一种半胱氨酸蛋白酶,通过介导自噬体形成过程中 ATG8 蛋白的加工和解偶联,在调控自噬中起着至关重要的作用。在非活性状态下,ATG4B 通过结构域隐藏其催化位点,结构域在与 ATG8 结合后会发生构象变化,从而暴露活性位点并使底物裂解。该酶是 ATG8 与磷脂酰乙醇胺 (PE) 脂化所必需的,这是自噬体生物合成的关键步骤。在病毒入侵时,ATG4B通过促进 TANK 结合激酶 1(TBK1 )的自噬降解,作为免疫反应负调节剂起抗病毒作用。ATG4B 充当促进 TBK1 和 GABA A 型受体相关蛋白)(GABARAP )之间相互作用的接头。这种相互作用由TBK1的ULD结构域中的LC3相互作用区(LIR)基序所介导,该基序介导TBK1- gabarap复合物的自噬降解。ATG4B过表达与结直肠癌中mTOR信号异常相关,并影响白血病和前列腺癌的肿瘤增殖和化疗耐药。在肿瘤治疗方面,它作为自噬调控靶点而具有潜在应用价值。

    参考文献

    技术支持

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