Cleaved Caspase-7 (Asp198) Rabbit mAb
目录号: F0275
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Lane 1: HeLa
Lane 2: HeLa (Staurosporine , 1 μM, 3 hr)
Lane 3: C2C12
Lane 4: C2C12 (Staurosporine, 1 μM, 3 hr)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 细胞核; 细胞外环境
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IF, FCM |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 18 kDa |
| 阳性对照 | HeLa (Staurosporine, 1 μM, 3 h); C2C12 (Staurosporine, 1 μM, 3 h); H-4-II-E (Staurosporine, 1 μM, 3 h) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| HeLa | Staurosporine (1 μM, 3 h) | ||||
| C2C12 | Staurosporine (1 μM, 3 h) | ||||
| H-4-II-E | Staurosporine (1 μM, 3 h) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
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Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 50min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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| IF |
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实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Asp198 位点被切割时，Cleaved Caspase-7 (Asp198) Rabbit mAb 才能检测内源性总 caspase-7 蛋白的水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P55210 |
| 克隆号 |
|---|
| K17H18 |
| 背景 |
|---|
Caspase-7 是天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族中进化保守的成员，最初被认为与 caspase-3 无关，因为它们共享最佳肽识别序列和共同的内源性蛋白质底物。在死亡受体或 DNA 损伤诱导的细胞凋亡过程中，这两种 caspase 均由启动子 caspase-8 和 -9 激活。Caspase-7 通过切割下游底物（如聚（ADP-核糖）聚合酶 (PARP)）在执行细胞凋亡中起重要作用，类似于 caspase-3。caspase-7 的激活涉及上游 caspase 在 Asp23、Asp198 和 Asp206 处的蛋白水解加工，以产生成熟的亚基。 Caspase-7 参与两种不同的凋亡信号通路：外在通路，由死亡受体配体启动，如 Fas 配体 (FasL) 和 TNF 相关凋亡诱导配体 (TRAIL)，以及内在通路。在外在通路中，受体聚集将死亡信号传递到细胞溶胶，激活 caspase-8 和 -10，进而处理执行者 caspase-3 和 -7。除了在凋亡中的作用外，caspase-7 的蛋白水解成熟在炎症条件下也观察到。 |
| 参考文献 |
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