Deadpan Rat mAb
目录号: F2046
操作要点
WB
蛋白定位
细胞核
建议使用 RIPA/核裂解液 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| IHC |
| 抗体类型 |
|---|
| Rat |
| 反应性 |
|---|
| D. Melanogaster |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 47 kDa |
| 阳性对照 | Drosophila larval brain, Drosophil embryos |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IHC |
|---|
实验步骤： 脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
Deadpan Rat mAb 可检测内源性总 Deadpan 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q26263 |
| 克隆号 |
|---|
| K20M7 |
| 背景 |
|---|
Deadpan (dpn) 是一种转录抑制因子，属于果蝇中基本螺旋-环-螺旋 (bHLH) 蛋白的 Hairy/Enhancer of Split (HES) 亚类。它通过促进神经干细胞 (神经母细胞) 的自我更新并抑制其分化，起到神经发生和性别决定的关键调控器的作用。Deadpan 受 Notch 信号通路调控，在神经细胞以及翅膀、眼睛和腿成虫盘等其他组织中表达。从结构上讲，Deadpan 包含一个促进 DNA 结合和二聚化的 bHLH 结构域、一个参与蛋白质-蛋白质相互作用的结构域和一个对转录抑制至关重要的 WRPW 基序。Deadpan 在抑制特定基因转录方面的作用对于果蝇神经和其他组织的正常发育至关重要。 |
| 参考文献 |
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