eIF3H Rabbit mAb
目录号: F1420
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Lane 1: Hela
Lane 2: 293
Lane 3: K562
Lane 4: RD
Lane 5: RAW
Lane 6: Hepa1
Lane 7: PC12
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| "WB, IP, IHC, IF " |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 40 kDa |
| 阳性对照 | human breast carcinoma; human colon carcinoma; 293; HeLa; K562; RD; Raw; Hepa1; PC12; SK-N-MC |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 90min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
eIF3H Rabbit mAb检测内源性总eIF3H蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| O15372 |
| 克隆号 |
|---|
| E24C7 |
| 背景 |
|---|
EIF3H 是一种关键的翻译起始因子，也是 JAMM 家族去泛素化酶的成员，与 EIF3F 共享非保守的 MPN 结构域。在多种癌症（包括乳腺癌）中都证实了 EIF3H 的高表达。EIF3H 通过去泛素化和稳定 YAP 来调节 Hippo-YAP 通路，促进肿瘤侵袭和转移。它与 YAP1 的 N 端区域相互作用，促进 YAP1 去泛素化。抑制 EIF3H 介导的 YAP 去泛素化可阻止乳腺癌模型中的肿瘤进展和转移。EIF3H 是真核翻译起始因子 3 (eIF-3) 复合物的一部分，该复合物包括 13 个亚基，在蛋白质合成起始的多个步骤中发挥作用。 |
| 参考文献 |
|---|
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