GSK-3α/β Rabbit mAb

目录号: F0282

Lane 1: NIH3T3
Lane 2: C6
Lane 3: CHO
Lane 4: COS7
Lane 5: Hela

规格	价格	库存
20ul	790	现货
50uL	1240	现货
100ul	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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客户使用该产品的2个实验数据

操作要点

蛋白定位：细胞膜; 细胞质; 内膜; 细胞核。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:50

抗体应用
WB, IP

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat, Hamster, Monkey

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
51 kDa, 46 kDa

阳性对照	NIH/3T3; C6; CHO; COS-7; Hela; MEF (WT)
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
GSK-3α/β Rabbit mAb 用于检测内源性 GSK-3α/β 总的蛋白水平。

别名
GSK3, GSK-3α, GSK3-β

Uniprot ID
P49840, P49841

克隆号
K1M18

背景
糖原合酶激酶-3 (Glycogen synthase kinase-3, GSK-3) 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在调节各种细胞功能（包括代谢、转录、翻译、细胞生长和凋亡）中发挥着至关重要的作用。 GSK-3 存在两种相似的异构体，称为 GSK-3α 和 GSK-3β。这些亚型具有几乎相同的中央激酶结构域，但其末端有很大不同。 GSK-3α 的大小为 52 kDa，其结构比 GSK-3β 大 5 kDa，这归因于氨基末端富含甘氨酸的延伸，其功能仍未知。 GSK-3α 参与调节淀粉样蛋白 β 肽的产生，β 淀粉样蛋白肽是与阿尔茨海默病进展相关的斑块的重要组成部分。另一方面，GSK-3β 作为心脏肥大的内在抑制剂。此外，GSK-3β 通过增强线粒体通透性转变来促进心脏损伤。GSK-3 是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可磷酸化糖原合酶并使其失活。它也是 PI3K/Akt 细胞存活途径的关键下游元件，其活性受到 Akt 介导的 GSK-3α Ser21 和 GSK-3β Ser9 磷酸化的抑制。

背景

糖原合酶激酶-3 (Glycogen synthase kinase-3, GSK-3) 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在调节各种细胞功能（包括代谢、转录、翻译、细胞生长和凋亡）中发挥着至关重要的作用。 GSK-3 存在两种相似的异构体，称为 GSK-3α 和 GSK-3β。这些亚型具有几乎相同的中央激酶结构域，但其末端有很大不同。 GSK-3α 的大小为 52 kDa，其结构比 GSK-3β 大 5 kDa，这归因于氨基末端富含甘氨酸的延伸，其功能仍未知。 GSK-3α 参与调节淀粉样蛋白 β 肽的产生，β 淀粉样蛋白肽是与阿尔茨海默病进展相关的斑块的重要组成部分。另一方面，GSK-3β 作为心脏肥大的内在抑制剂。此外，GSK-3β 通过增强线粒体通透性转变来促进心脏损伤。GSK-3 是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可磷酸化糖原合酶并使其失活。它也是 PI3K/Akt 细胞存活途径的关键下游元件，其活性受到 Akt 介导的 GSK-3α Ser21 和 GSK-3β Ser9 磷酸化的抑制。

参考文献
[1] Matsuda T, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105(52):20900-20905. [2] Phiel CJ, et al. Nature. 2003;423(6938):435-439.

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%