HRS Rabbit mAb
目录号: F1442
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Lane 1: A-431
Lane 2: 786-O
Lane 3: MOLT-4
Lane 4: CCRF-CEM
Lane 5: RPMI 8226
Lane 6: SK-OV-3
Lane 7: Neuro-2a
Lane 8: PC-3
Lane 9: M-1
Lane 10: Hepa1-6
Lane 11: COS-7
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 胞内体; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 100 kDa |
| 阳性对照 | A-431; 786-O; MOLT-4; CCRF-CEM; RPMI 8226; SK-OV-3; Neuro-2a; PC-3; M-1; Hepa1-6; COS-7; 293T |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IF |
|---|
实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
HRS Rabbit mAb识别内源性HRS总蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| HGS,HRS |
| Uniprot ID |
|---|
| O14964 |
| 克隆号 |
|---|
| A20M10 |
| 背景 |
|---|
肝细胞生长因子调节酪氨酸激酶底物 (HRS) 是一种早期内体蛋白，可调节生长因子受体复合物的运输。它与 PELP1 结合，将其隔离在细胞质中并以 EGF 受体依赖性方式激活 MAPK，不依赖于雌激素受体、Shc 和 Src。HRS 是一种主要的酪氨酸磷酸化蛋白，广泛表达并被各种生长因子和细胞因子磷酸化。它包含一个 VHS 结构域、网格蛋白盒结构域、磷脂酰肌醇 3-磷酸相互作用 FYVE 结构域、两个卷曲螺旋结构域、一个脯氨酸结构域和一个富含脯氨酸/谷氨酰胺的结构域。HRS 定位于细胞质和膜相关区室，受磷脂酰肌醇 3-磷酸与 FYVE 结构域的相互作用调节。它与 STAM、Smad2、EPS15、SNAP25 和网格蛋白相互作用，充当囊泡运输和信号传导的整合子，并参与内体 EGFR 分选。 |
| 参考文献 |
|---|
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