JNK1 + JNK2 + JNK3 Rabbit mAb

目录号: F1574

Lane 1: Mouse brain
Lane 2: Rat brain
Lane 3: Rat heart
Lane 4: RAW 264.7
Lane 5: NIH/3T3

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质; 细胞核; 细胞连接; 突触; 高尔基体
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:50 IF1:250 FCM1:180

抗体应用
WB, IP, IF, FC

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat, Zebrafish, Bovine, Dog, Cow, Monkey, Xenopus, tropicalis

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
48 kDa

阳性对照	Mouse brain; Rat brain; Rat heart; RAW 264.7; PC-12; NIH/3T3; Zebrafish; X. tropicalis; Mouse Vascular smooth muscle cell; HeLa; K562; Jurkat; Neuro-2a; UMNSAH/DF-1; MDCK; MDBK; COS-1
阴性对照

客户使用Selleck的发表文献2篇

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 120min)。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 120min)。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

IF
实验步骤：标本制备 1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。 2. 室温固定细胞 15 分钟。 3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。 4. 继续进行免疫染色。免疫染色 1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。 2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。 3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。 4. 4°C 孵育过夜。 5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。 7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。 9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

实验步骤：

标本制备

1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。

注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

2. 室温固定细胞 15 分钟。

3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

4. 继续进行免疫染色。

免疫染色

1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。

2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。

3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。

4. 4°C 孵育过夜。

5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。

7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。

9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
JNK1 + JNK2 + JNK3 mAb可识别内源性的JNK1 + JNK2 + JNK3总蛋白水平。

别名
JNK1 + JNK2 + JNK3,SAPK/JNK,SAPK/JNK Antibody

Uniprot ID
P45983, P45984, P53779

克隆号
M18P18

背景
应激激活蛋白激酶/Jun-氨基末端激酶 (SAPK/JNK) 主要由多种环境胁迫信号触发，偶尔由生长因子（GF）和G蛋白偶联受体( GPCR) 激动剂触发。与其他 MAPK成员类似，其核心信号模块由 MAPKKK（通常是 MEKK1-MEKK4）或混合谱系激酶 (MLK) 之一组成，它们通过磷酸化激活 MKK4/7。激活后，MKK 进一步磷酸化并激活 SAPK/JNK 激酶。应激信号通过 Rho 家族的小 GTPase（Rac、Rho、cdc42）传递到此级联，其中 Rac1 和 cdc42 促进 MEKK 和 MLK 的刺激。另外，MKK4/7 的激活也可通过刺激生发中心激酶 (GCK) 家族成员独立于 GTPase 发生。SAPK/JNK 基因经历可变剪接，产生多种同工型。当 SAPK/JNK 作为二聚体活跃时，它可以转位到细胞核中，并通过影响 c-Jun、ATF-2 和各种其他转录因子来调节转录。

背景

应激激活蛋白激酶/Jun-氨基末端激酶 (SAPK/JNK) 主要由多种环境胁迫信号触发，偶尔由生长因子（GF）和G蛋白偶联受体( GPCR) 激动剂触发。与其他 MAPK成员类似，其核心信号模块由 MAPKKK（通常是 MEKK1-MEKK4）或混合谱系激酶 (MLK) 之一组成，它们通过磷酸化激活 MKK4/7。激活后，MKK 进一步磷酸化并激活 SAPK/JNK 激酶。应激信号通过 Rho 家族的小 GTPase（Rac、Rho、cdc42）传递到此级联，其中 Rac1 和 cdc42 促进 MEKK 和 MLK 的刺激。另外，MKK4/7 的激活也可通过刺激生发中心激酶 (GCK) 家族成员独立于 GTPase 发生。SAPK/JNK 基因经历可变剪接，产生多种同工型。当 SAPK/JNK 作为二聚体活跃时，它可以转位到细胞核中，并通过影响 c-Jun、ATF-2 和各种其他转录因子来调节转录。

参考文献
[1] Kyriakis JM, et al. Physiol Rev. 2001 Apr;81(2):807-69. [2] Ichijo H, et al. Oncogene. 1999 Nov 1;18(45):6087-93.

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