LRRK2 Rabbit mAb
目录号: F1550
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Lane 1: A549 (LRRK2 KO)
Lane 2: A549 (WT)
操作要点
WB
蛋白定位
胞质囊泡; 高尔基体 (PMID:23395371); 细胞突起; 内质网 (PMID:25201882); 胞内体; 溶酶体; 线粒体外膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 286 kDa |
| 阳性对照 | Mouse brain; Mouse cerebral cortex, A549; MEF; HEK293 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
LRRK2 Rabbit mAb 可检测内源性总 LRRK2 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q5S007 |
| 克隆号 |
|---|
| P18P16 |
| 背景 |
|---|
LRRK2（富含亮氨酸重复激酶 2）是一种高度复杂的蛋白质，具有四个蛋白质-蛋白质相互作用结构域和两种不同的酶活性。作为丝氨酸-苏氨酸激酶，LRRK2 可以自磷酸化其自身残基并磷酸化一组选定的外部底物。从结构上讲，LRRK2 包括 N 端富含亮氨酸重复序列 (LRR)、Ras 样 GTPase (ROC) 结构域、MLK 蛋白激酶结构域和 C 端 WD40 重复结构域。 LRRK2 突变是导致帕金森病最常见的遗传原因之一，其中 G2019S 突变尤为常见。该突变导致 LRRK2 激酶活性增加，从而导致神经突长度逐渐减少，导致神经突丢失和神经元存活率降低。 |
| 参考文献 |
|---|
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