MAVS Rabbit mAb
目录号: F1399
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Lane 1: Neuro-2a
Lane 2: BA/F3
Lane 3: C2C12
Lane 4: Hepa 1-6
Lane 5: NIH/3T3
操作要点
WB
蛋白定位
内膜; 线粒体; 线粒体外膜; 过氧化物酶体
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IHC, IF |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 75 kDa |
| 阳性对照 | Neuro-2a; BA/F3; C2C12; Hepa 1-6; NIH/3T3 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 120min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
MAVS Rabbit mAb识别内源性的MAVS总蛋白。用免疫组化方法观察到小鼠脑内有非特异性核染色、小鼠胃上皮有非特异顶膜染色。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q8VCF0 |
| 克隆号 |
|---|
| P1P22 |
| 背景 |
|---|
MAVS 是一种衔接蛋白，参与线粒体、过氧化物酶体和线粒体相关内质网膜 (MAM) 中的 RIG-I 样受体 (RLR) 信号传导，对 RNA 病毒的固有免疫至关重要。MAVS 对 RLR 信号调节的代谢重编程至关重要。过氧化物酶体 MAVS 通过 IRF1 选择性诱导 III 型 IFN 表达，而线粒体 MAVS 诱导 I 型 IFN 和 ISG 表达。MAVS 与 HK2 相互作用，引导葡萄糖流入未感染细胞中的糖酵解。它还与过氧化物酶体的 G6PD 相互作用，与 TRAF6 和 IRF1 形成信号体，控制葡萄糖流入戊糖磷酸途径 (PPP) 和 III 型 IFN 产生。泛素化、聚集和香叶基香叶基化等翻译后修饰可调节 MAVS 功能。 MAVS 驱动从糖酵解到 PPP 和己糖胺生物合成途径 (HBP) 的转换，过氧化物酶体 MAVS 控制葡萄糖流入 PPP 和 III 型 IFN 表达，而位于 MAMs 的 MAVS 控制葡萄糖流入 HBP 和 I 型 IFN 表达。 |
| 参考文献 |
|---|
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