MEK2 Rabbit mAb

目录号: F1341

  • Lane 1: 293
    Lane 2: L929
    Lane 3: MEF
    Lane 4: MEF (MEK1 KO)
    Lane 5: Hela
    Lane 6: COS
规格 价格 库存 购买数量
20uL 790 现货
50uL 1240 现货
100uL 1990 现货
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客户使用该产品的1个实验数据

WB

操作要点

蛋白定位:细胞质; 内膜
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。

使用信息

稀释比例
1:1000
抗体应用
WB
抗体类型
Rabbit
反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey
储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
预测分子量
45 kda
阳性对照 Hela; 293; L929; PC12; COS
阴性对照 Hela (transfected with 100 nM MEK2 siRNA II); MEF (MEK2 KO)

实验方法

WB
实验步骤:
 
样品制备
1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含PMSF),冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
 
转膜
1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上(推荐采用 0.45 µm PVDF 膜)。 PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件:200 mA, 120 min。(电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
 
封闭
1. 电转移后,室温下用 TBST 洗膜 5 min;
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:1000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
 

Datasheet & SDS

生物描述

特异性

MEK2 Rabbit mAb检测内源性MEK2总蛋白水平。

Uniprot ID
P36507
克隆号
M18L8
背景

丝裂原活化蛋白 (MAP) 激酶,也称为细胞外信号调节激酶 (ERKs),被认为是多种生化信号的整合点,因为它们由多种细胞外信号激活,在苏氨酸和酪氨酸上迅速磷酸化,并且高度保守。 MEK2 也称为 MAPK 或 Erk 激酶,是一种双特异性蛋白激酶,参与丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联,调节细胞生长和分化。MEK1 和 MEK2 通过 Raf 样分子对子域 VIII 活化环中 217 和 221 位的两个丝氨酸残基进行磷酸化而激活。MEK1/2 可被多种生长因子、细胞因子、膜去极化和钙内流激活。

参考文献

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