Microcephalin-1/BRIT1 Rabbit mAb

目录号: F1443

Filter:

Lane 1: Hela
Lane 2: Caki
Lane 3: COS-7
Lane 4: C6
Lane 5: NIH/3T3
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F1443 at 1/100 dilution.

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质; 细胞骨架
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey

储存液配方

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
100 kDa

阳性对照	Hela; Caki; COS-7; C6; NIH/3T3
阴性对照

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Microcephalin-1/BRIT1 Rabbit mAb检测内源性Microcephalin-1/BRIT1总蛋白水平。

Uniprot ID
Q8NEM0

克隆号
N5J16

背景
小头蛋白 1 (BRIT1) 是一种关键的 DNA 损伤反应和修复蛋白，在人类原发性小头畸形中发生突变。它通过调节 BRCA1 和 BRCA2 等 DNA 修复蛋白的募集并在 DNA 损伤后启动 ATM 和 ATR 信号通路，充当 DNA 修复的早期介质。BRIT1 是六种关键的 DNA 损伤反应和修复蛋白之一，其他六种蛋白为 ATM、CHEK2、BRCA1、RAD51 和 PARP-1。在正常组织细胞中，BRIT1 主要位于细胞核中，在那里它协调修复蛋白的募集并触发 ATM/ATR 损伤反应信号级联。 BRIT1 在细胞质中表达较高、核中表达较低与肿瘤分级较高和 ER 阴性状态相关，而在 BRCA2 肿瘤中则观察到 CHEK2 在细胞质中表达较低、BRIT1 在细胞质中表达较高。BRIT1 与其他 DNA 修复蛋白（53BP1、MDC1、NBS1、ATM、RPA 和 ATR）共定位，并且对于它们的激活至关重要。它可能通过染色质重塑来调节 DNA 修复以应对 DNA 损伤，从而促进修复蛋白进入 DNA。

背景

小头蛋白 1 (BRIT1) 是一种关键的 DNA 损伤反应和修复蛋白，在人类原发性小头畸形中发生突变。它通过调节 BRCA1 和 BRCA2 等 DNA 修复蛋白的募集并在 DNA 损伤后启动 ATM 和 ATR 信号通路，充当 DNA 修复的早期介质。BRIT1 是六种关键的 DNA 损伤反应和修复蛋白之一，其他六种蛋白为 ATM、CHEK2、BRCA1、RAD51 和 PARP-1。在正常组织细胞中，BRIT1 主要位于细胞核中，在那里它协调修复蛋白的募集并触发 ATM/ATR 损伤反应信号级联。 BRIT1 在细胞质中表达较高、核中表达较低与肿瘤分级较高和 ER 阴性状态相关，而在 BRCA2 肿瘤中则观察到 CHEK2 在细胞质中表达较低、BRIT1 在细胞质中表达较高。BRIT1 与其他 DNA 修复蛋白（53BP1、MDC1、NBS1、ATM、RPA 和 ATR）共定位，并且对于它们的激活至关重要。它可能通过染色质重塑来调节 DNA 修复以应对 DNA 损伤，从而促进修复蛋白进入 DNA。

参考文献
[1] Zhu X, et al. J Breast Cancer. 2018 Sep;21(3):297-305. [2] Peng G, et al. Nat Cell Biol. 2009 Jul;11(7):865-72.

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