p38α/MAPK14 Rabbit mAb
目录号: F1221
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Lane 1: Jurkat
Lane 2: HeLa
Lane 3: MCF-7
Lane 4: HEK293
Lane 5: NIH/3T3
Lane 6: 3T3-L1
Lane 7: PC-12
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF, F |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 42 kDa |
| 阳性对照 | HAP1; HeLa; Jurkat; C6; NIH/3T3; 3T3-L1; PC-12; MCF-7; HEK293 |
|---|---|
| 阴性对照 | HAP1 (p38 KO) |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 90min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
| IF |
|---|
实验步骤：
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
p38 alpha/MAPK14 Rabbit mAb识别内源性p38 α /MAPK14总蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| p38α MAPK14,p38α MAPK |
| Uniprot ID |
|---|
| Q16539, Q15759 |
| 克隆号 |
|---|
| J11A5 |
| 背景 |
|---|
MAPK14 编码 p38α，它是 p38 丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 家族的原型成员，由应激和炎症细胞因子激活，并调节细胞功能，如增殖、分化和存活。p38 MAPK 家族有四个成员：p38α (SAPK2a)、p38β (SAPK2b)、p38γ (SAPK3) 和 p38δ (SAPK4)，它们具有重叠和特定的功能。p38α 显性负形式及其激活剂 MKK3 和 MKK6 的心脏特异性表达可增强心脏肥大。p38α MAPK 是一种信号分子，可调节细胞对应激的反应并控制细胞增殖和存活。它通过磷酸化/转位 Bcl-2 家族蛋白、激活 Caspase 8 、调节膜泡和核凝聚来促进凋亡。在转录水平上，它通过单胺氧化酶和GADD诱导基因的表达来介导细胞凋亡，从而通过上调促凋亡蛋白和下调存活途径使细胞对凋亡信号更加敏感。 |
| 参考文献 |
|---|
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