Phospho-PDHA1 (Ser 293) Rabbit mAb
目录号: F1658
Filter:
-
Lane 1: Rat kidney lysates
Lane 2: 293T
客户使用该产品的1个实验数据
操作要点
蛋白定位：线粒体。
WB
建议使用 RIPA Lysis Buffer 制备裂解物。
WB
建议使用 RIPA Lysis Buffer 制备裂解物。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IHC, Elisa |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 43 kDa |
| 阳性对照 | human colon; human breast; mouse colon; mouse kidney; rat kidney; rat colon; HEK-293T; HT-29 |
|---|---|
| 阴性对照 | Mouse kidney (incubated with phosphatase); Rat kidney (incubated with phosphatase); HEK-293T (treated with Lambda Phosphatase); HT-29 (treated with Lambda Phosphatase) |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 |
| HT-29 | Sodium butyrate treated (8 mM , 24 h) |
| 点击查看更多样品数据 | |
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
PDHA1 (phospho S293) Rabbit mAb 仅当 Ser293 位点发生磷酸化时才可检测内源性总 PDHA1 (phospho S293) 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Phospho PDHA1 (Ser 293) |
| Uniprot ID |
|---|
| P08559 |
| 克隆号 |
|---|
| L15N22 |
| 背景 |
|---|
丙酮酸脱氢酶复合物 (Pyruvate Dehydrogenase Complex, PDC) 催化丙酮酸不可逆地转化为乙酰辅酶 A，将糖酵解与柠檬酸循环联系起来。PDHA1 亚基是 E1 酶的一个组成部分，是由两个 α (PDHA1) 和两个 β (PDHB) 亚基组成的异四聚体。PDHA1 包含丙酮酸脱羧的活性位点，对 PDC 功能至关重要。PDC 的活性受 PDHA1 亚基上特定丝氨酸残基的磷酸化和去磷酸化调控。丙酮酸脱氢酶激酶 (PDK) 对丝氨酸残基 S232、S293 和 S300 的磷酸化会使复合物失活，从而降低其活性。相反，丙酮酸脱氢酶磷酸酶 (PDP) 的去磷酸化会重新激活复合物。这种调控机制对于葡萄糖代谢至关重要，并且与胰岛素抵抗和 2 型糖尿病有关。PDHA1 的磷酸化进一步受到乙酰化的调控，从而增强了对 PDH 活性的抑制。 |
| 参考文献 |
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