Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) Rabbit mAb

目录号: F0241

Lane 1: HeLa (hydroxyurea,4 mM,20hrs)
Lane 2: HeLa (paclitaxel,100 nM,20hrs)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
更大包装有超大折扣点击询价
	400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IF1:50 FCM1:50

抗体应用
WB, IF, FCM

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
35, 40, 48 kDa

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

IF
实验步骤：标本制备 1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。 2. 室温固定细胞 15 分钟。 3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。 4. 继续进行免疫染色。免疫染色 1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。 2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。 3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。 4. 4°C 孵育过夜。 5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。 7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。 9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

实验步骤：

标本制备

1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。

注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

2. 室温固定细胞 15 分钟。

3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

4. 继续进行免疫染色。

免疫染色

1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。

2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。

3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。

4. 4°C 孵育过夜。

5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。

7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。

9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
仅当 Thr288, Thr232 或 Thr198 位点分别发生磷酸化时，Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) Rabbit mAb 可检测内源性总 Phospho-Aurora A/B 的蛋白水平。

克隆号
H12A24

背景
Aurora 激酶是一种新型的丝氨酸/苏氨酸激酶家族，在调控有丝分裂细胞分裂中起着关键作用。该家族由三个密切相关的成员组成：Aurora-A、Aurora-B 和 Aurora-C，它们是酵母 Ipll 和果蝇极光激酶的同源物，以参与着丝粒功能、双极纺锤体组装和染色体分离而闻名。所有三种哺乳动物 Aurora 激酶都具有高度保守的催化结构域，以及短的 C 端结构域和不同长度的 N 端结构域。Aurora-A 主要位于着丝粒、有丝分裂纺锤体微管和有丝分裂细胞的细胞质中。其蛋白质水平在细胞周期的 G1 和 S 期较低，但在 G2/M 期达到峰值。Aurora-A 催化域内 Thr288 位点的磷酸化可增强其激酶活性，这对于着丝粒分离、成熟以及纺锤体的组装和稳定性至关重要。Aurora-B 表达也在 G2/M 期达到峰值，其激酶活性从中期到有丝分裂结束时达到最高水平。在前期，Aurora-B 与染色体结合，然后在后期重新定位到纺锤体。它通过控制微管-着丝粒附着和胞质分裂来调控染色体分离。Aurora-A 和 Aurora-B 的表达在 G2/M 期转变期间与组蛋白 H3 的磷酸化紧密协调，对有丝分裂调控具有关键作用。

背景

Aurora 激酶是一种新型的丝氨酸/苏氨酸激酶家族，在调控有丝分裂细胞分裂中起着关键作用。该家族由三个密切相关的成员组成：Aurora-A、Aurora-B 和 Aurora-C，它们是酵母 Ipll 和果蝇极光激酶的同源物，以参与着丝粒功能、双极纺锤体组装和染色体分离而闻名。所有三种哺乳动物 Aurora 激酶都具有高度保守的催化结构域，以及短的 C 端结构域和不同长度的 N 端结构域。Aurora-A 主要位于着丝粒、有丝分裂纺锤体微管和有丝分裂细胞的细胞质中。其蛋白质水平在细胞周期的 G1 和 S 期较低，但在 G2/M 期达到峰值。Aurora-A 催化域内 Thr288 位点的磷酸化可增强其激酶活性，这对于着丝粒分离、成熟以及纺锤体的组装和稳定性至关重要。Aurora-B 表达也在 G2/M 期达到峰值，其激酶活性从中期到有丝分裂结束时达到最高水平。在前期，Aurora-B 与染色体结合，然后在后期重新定位到纺锤体。它通过控制微管-着丝粒附着和胞质分裂来调控染色体分离。Aurora-A 和 Aurora-B 的表达在 G2/M 期转变期间与组蛋白 H3 的磷酸化紧密协调，对有丝分裂调控具有关键作用。

参考文献
[1] Katayama H, et al. Cancer Metastasis Rev. 2003 Dec;22(4):451-64. [2] Pascreau G, et al. Prog Cell Cycle Res. 2003:5:369-74.

技术支持

在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。

* 必填项