Phospho-Axl (Tyr702) Rabbit mAb
目录号: F0592
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Lane 1: NCI-H1299
Lane 2: NCI-H1299(Gas6-treated, 100 ng/ml, 10 minutes)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜；内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 138 kda |
| 阳性对照 | NCI-H1299 (Gas6-treated, 100 ng/ml, 10 min) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| NCI-H1299 | Gas6 treatment (100 ng/mL, 10 min) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Phospho-Axl (Tyr702) Rabbit mAb仅当酪氨酸702位点 (Tyr702) 磷酸化时才可识别内源性 Axl 蛋白。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P30530 |
| 克隆号 |
|---|
| F18P21 |
| 背景 |
|---|
AXL 是 TAM 受体家族的成员，该家族包括 TYRO3、AXL 和 MER。其高亲和力配体是生长停滞特异性蛋白 6 (GAS6)，GAS6/AXL 信号通路在促进癌细胞存活、增殖、迁移、侵袭、上皮-间充质转化 (EMT)、血管生成、耐药性、免疫调控和干细胞维持方面发挥着重要作用。AXL 由细胞外、跨膜和细胞内结构域组成。细胞外区域具有两个免疫球蛋白 (Ig) 样重复序列和两个纤连蛋白 III 型 (Fro III) 样重复序列，类似于神经细胞粘附分子 (NCAM)。Ig 基序介导 AXL 与 GAS6 的相互作用，由 Fro III 重复序列调控。细胞内结构域对于自身磷酸化和激酶活性至关重要。 GAS6 结合可激活下游信号通路，包括磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)、Akt、S6K 和 NF-κB。AXL 有六个已确定的磷酸化位点：Tyr698、Tyr702、Tyr703、Tyr779、Tyr821 和 Tyr866，其中 Tyr702 磷酸化可在某些癌细胞系中观察到。 |
| 参考文献 |
|---|
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