Phospho-c-Raf (Ser338) Rabbit mAb
目录号: F0353
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Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F0353 at 1/100 dilution.
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 内膜; 线粒体; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 74 kDa |
| 阳性对照 | NIH/3T3 (TPA-treated); COS (TPA-treated); Hela (TPA-treated) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| NIH/3T3 | TPA treatment | ||||
| COS | TPA treatment | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
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Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser338 位点发生磷酸化时，Phospho-c-Raf (Ser338) Rabbit mAb 可检测内源性总 Phospho-c-Raf (Ser338) 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P04049 |
| 克隆号 |
|---|
| F15C8 |
| 背景 |
|---|
Raf 激酶家族包括 A-Raf、B-Raf 和 c-Raf (Raf-1)，是作为 Ras 下游效应子的关键丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在调控细胞增殖、存活和肿瘤形成中发挥着重要作用。c-Raf 包含一个核心激酶结构域，负责磷酸化下游靶标（如 MEK），以及多个调控其活性的磷酸化位点。Ser338 处的磷酸化对于 c-Raf 激活至关重要；它可以响应有丝分裂信号而发生，也可以独立于 Ras 通过微管解聚后 Cdc42/Rac/Pak 激活而发生。Ser338 和 Tyr341 的磷酸化会破坏分子内相互作用以及 c-Raf 与 RKIP 的结合，从而促进其完全激活。这使得 c-Raf 能够通过 MAPK 通路传播信号，支持细胞生长和存活，并促进肿瘤形成。 |
| 参考文献 |
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