Phospho-cPLA2 (Ser505) Rabbit mAb

目录号: F1943

Lane 1: HeLa
Lane 2: HeLa (λ-phosphatase treated)
Lane 3: NIH/3T3
Lane 4: C2C12

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质; 高尔基体; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:100

抗体应用
WB, IP

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
95 kDa

阳性对照	Hela; NIH/3T3; C2C12
阴性对照	Hela (λ-phosphatase)

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-cPLA2 (Ser505) Rabbit mAb 仅当 Ser505 位点磷酸化时才可检测内源性总 Phospho-cPLA2 (Ser505) 的蛋白水平。

别名
Cytosolic Phospholipase A2 (phospho S505),Phospho-cPLA2 (Ser505)

Uniprot ID
P47712

克隆号
L10N8

背景
胞浆磷脂酶 A2 (Cytosolic Phospholipase A2, cPLA2) 是一种细胞间酶，属于 PLA2 酶家族的 IV 组，由六个亚基 (cPLA2α、cPLA2β、cPLA2γ、cPLA2δ、cPLA2ε 和 cPLA2ζ) 组成，分子量范围为 85 至 114 kDa。这些酶主要存在于血小板、巨噬细胞和肝脏、胰腺、脑和心脏等组织中。cPLA2 水解磷脂 sn-2 位的酯键，释放花生四烯酸和溶血磷脂，它们是炎症和其他生理过程的关键介质。cPLA2 的激活需要其转位到膜上，这得益于两个 Ca²⁺离子与其 CaLB 结构域的结合，从而将酶锚定到脂质双层上。酶的活性进一步受磷酸化调控，特别是在柔性连接区 Ser505 残基处。这种磷酸化主要由丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 介导，对于酶有效转位到富含磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2) 的膜至关重要。Ser505 突变会延迟膜转位，即使在 Ca²⁺ 和 PIP2 水平升高的情况下也是如此，这凸显了这种磷酸化事件在 cPLA2 激活中的重要性。

背景

胞浆磷脂酶 A2 (Cytosolic Phospholipase A2, cPLA2) 是一种细胞间酶，属于 PLA2 酶家族的 IV 组，由六个亚基 (cPLA2α、cPLA2β、cPLA2γ、cPLA2δ、cPLA2ε 和 cPLA2ζ) 组成，分子量范围为 85 至 114 kDa。这些酶主要存在于血小板、巨噬细胞和肝脏、胰腺、脑和心脏等组织中。cPLA2 水解磷脂 sn-2 位的酯键，释放花生四烯酸和溶血磷脂，它们是炎症和其他生理过程的关键介质。cPLA2 的激活需要其转位到膜上，这得益于两个 Ca²⁺离子与其 CaLB 结构域的结合，从而将酶锚定到脂质双层上。酶的活性进一步受磷酸化调控，特别是在柔性连接区 Ser505 残基处。这种磷酸化主要由丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 介导，对于酶有效转位到富含磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2) 的膜至关重要。Ser505 突变会延迟膜转位，即使在 Ca²⁺ 和 PIP2 水平升高的情况下也是如此，这凸显了这种磷酸化事件在 cPLA2 激活中的重要性。

参考文献
[1] Khan SA, et al. Int J Mol Sci. 2023 Jan 10;24(2):1353.

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