Phospho-cPLA2 (Ser505) Rabbit mAb
目录号: F1943
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Lane 1: HeLa
Lane 2: HeLa (λ-phosphatase treated)
Lane 3: NIH/3T3
Lane 4: C2C12
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 高尔基体; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 95 kDa |
| 阳性对照 | Hela; NIH/3T3; C2C12 |
|---|---|
| 阴性对照 | Hela (λ-phosphatase) |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Phospho-cPLA2 (Ser505) Rabbit mAb 仅当 Ser505 位点磷酸化时才可检测内源性总 Phospho-cPLA2 (Ser505) 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Cytosolic Phospholipase A2 (phospho S505),Phospho-cPLA2 (Ser505) |
| Uniprot ID |
|---|
| P47712 |
| 克隆号 |
|---|
| L10N8 |
| 背景 |
|---|
胞浆磷脂酶 A2 (Cytosolic Phospholipase A2, cPLA2) 是一种细胞间酶，属于 PLA2 酶家族的 IV 组，由六个亚基 (cPLA2α、cPLA2β、cPLA2γ、cPLA2δ、cPLA2ε 和 cPLA2ζ) 组成，分子量范围为 85 至 114 kDa。这些酶主要存在于血小板、巨噬细胞和肝脏、胰腺、脑和心脏等组织中。cPLA2 水解磷脂 sn-2 位的酯键，释放花生四烯酸和溶血磷脂，它们是炎症和其他生理过程的关键介质。cPLA2 的激活需要其转位到膜上，这得益于两个 Ca2+离子与其 CaLB 结构域的结合，从而将酶锚定到脂质双层上。酶的活性进一步受磷酸化调控，特别是在柔性连接区 Ser505 残基处。这种磷酸化主要由丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 介导，对于酶有效转位到富含磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2) 的膜至关重要。Ser505 突变会延迟膜转位，即使在 Ca2+ 和 PIP2 水平升高的情况下也是如此，这凸显了这种磷酸化事件在 cPLA2 激活中的重要性。 |
| 参考文献 |
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