Phospho-eNOS (Ser1177) Rabbit mAb

目录号: F0354

Lane 1: BAEC (phosphatase treated)
Lane 2: BAEC (VEGF treated)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:25

抗体应用
WB, IP

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Bovine, Pig

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
140 kDa

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
仅当 Ser1177 位点发生磷酸化时，Phospho-eNOS (Ser1177) Rabbit mAb才可检测内源性总 Phospho-eNOS 的蛋白水平。

别名
eNOS (phospho S1177),Phospho-eNOS (Ser1177)

克隆号
N17K15

背景
内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 对健康心血管系统的调控和维持至关重要。eNOS 基因的遗传多态性、eNOS 二聚化的破坏及其复杂的信号传导调控突显了 eNOS 的重要性。eNOS 由 NOS3 基因编码，位于人类 7 号染色体的 7q35-7q36 区域。该酶能够产生一氧化氮 (NO)，这是一种对心血管健康至关重要的关键神经递质和神经调控因子，因此在心血管系统中起着保护作用。 eNOS 基因的多态性与心血管疾病 (CVD) 风险增加有关。eNOS 催化 NO 的产生，NO 是血压、血管重塑和血管生成的关键调控因子。其活性由多个位点的磷酸化控制，其中研究最广泛的是 Ser1177（可激活 eNOS）和 Thr495（可抑制 eNOS）。Ser1177 处的 eNOS 激活由各种蛋白激酶介导，包括 Akt/PKB、PKA 和 AMPK，以响应不同的刺激。

背景

内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 对健康心血管系统的调控和维持至关重要。eNOS 基因的遗传多态性、eNOS 二聚化的破坏及其复杂的信号传导调控突显了 eNOS 的重要性。eNOS 由 NOS3 基因编码，位于人类 7 号染色体的 7q35-7q36 区域。该酶能够产生一氧化氮 (NO)，这是一种对心血管健康至关重要的关键神经递质和神经调控因子，因此在心血管系统中起着保护作用。 eNOS 基因的多态性与心血管疾病 (CVD) 风险增加有关。eNOS 催化 NO 的产生，NO 是血压、血管重塑和血管生成的关键调控因子。其活性由多个位点的磷酸化控制，其中研究最广泛的是 Ser1177（可激活 eNOS）和 Thr495（可抑制 eNOS）。Ser1177 处的 eNOS 激活由各种蛋白激酶介导，包括 Akt/PKB、PKA 和 AMPK，以响应不同的刺激。

参考文献
[1] Tran N, et al. Am J Biomed Sci Res. 2022;15(2):153-177. [2] Chen ZP, et al. FEBS Lett. 1999 Jan 29;443(3):285-9.

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