Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr980) Rabbit mAb

目录号: F1451

Filter:

Lane 1: MCF-7
Lane 2: MCF-7(IGF-I-treated)
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F1451 at 1/100 dilution.

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞膜; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
95 Kda

阳性对照	MCF-7 (IGF-I-treated)
阴性对照	MCF-7 (untreated)

样品处理数据示例

样品	处理情况
MCF-7	IGF-I treatment
点击查看更多样品数据

^*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org

样品	处理情况

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr980) Rabbit mAb 仅当酪氨酸980位点 (Tyr980) 磷酸化时才识别内源性 IGF-IR β 蛋白。该抗体可能与活化的胰岛素受体和 FLT3 发生交叉反应。

Uniprot ID
P08069

克隆号
K22N4

背景
1 型胰岛素样生长因子受体 (IGF-1R) 是一种与胰岛素受体 (IR) 相关的受体酪氨酸激酶 (RTK)，以二聚体复合物的形式存在，其中有两个细胞外 α 亚基和两个 β 亚基通过二硫键连接。成熟的 IGF-1R 由 α 亚基和 β 亚基组成，它们通过二硫键以 β-α-α-β 构型连接。α 亚基完全位于细胞外，而 β 亚基跨越膜并具有内在酪氨酸激酶活性。IGF-1R 主要调控细胞增殖、存活、分化和运动，主要参与葡萄糖代谢。IGF-1R 的激活涉及配体诱导的受体酪氨酸激酶 (TK) 结构域内特定酪氨酸残基的磷酸化。当 IGF-1 或 IGF-2 与受体结合时，它会诱导 IGF-1R 发生构象转变，从而导致 TK 结构域活化环中酪氨酸残基的自磷酸化，特别是 Tyr1131、Tyr1135 和 Tyr1136。这种磷酸化会破坏活化环的自抑制结构，从而增强激酶活性。Tyr980 的磷酸化对激酶活化至关重要，可形成下游接头蛋白的对接位点。这些磷酸化事件促进了关键信号通路的激活，包括 PI3K 和 MAPK，这些通路对于调控细胞增殖、存活和分化等过程至关重要。

背景

1 型胰岛素样生长因子受体 (IGF-1R) 是一种与胰岛素受体 (IR) 相关的受体酪氨酸激酶 (RTK)，以二聚体复合物的形式存在，其中有两个细胞外 α 亚基和两个 β 亚基通过二硫键连接。成熟的 IGF-1R 由 α 亚基和 β 亚基组成，它们通过二硫键以 β-α-α-β 构型连接。α 亚基完全位于细胞外，而 β 亚基跨越膜并具有内在酪氨酸激酶活性。IGF-1R 主要调控细胞增殖、存活、分化和运动，主要参与葡萄糖代谢。IGF-1R 的激活涉及配体诱导的受体酪氨酸激酶 (TK) 结构域内特定酪氨酸残基的磷酸化。当 IGF-1 或 IGF-2 与受体结合时，它会诱导 IGF-1R 发生构象转变，从而导致 TK 结构域活化环中酪氨酸残基的自磷酸化，特别是 Tyr1131、Tyr1135 和 Tyr1136。这种磷酸化会破坏活化环的自抑制结构，从而增强激酶活性。Tyr980 的磷酸化对激酶活化至关重要，可形成下游接头蛋白的对接位点。这些磷酸化事件促进了关键信号通路的激活，包括 PI3K 和 MAPK，这些通路对于调控细胞增殖、存活和分化等过程至关重要。

参考文献
[1] Girnita L, et al. Cell Mol Life Sci. 2014 Jul;71(13):2403-27.

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