Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) Rabbit mAb

目录号: F0247

Filter:

Lane 1: Hela
Lane 2: Hela (IGF treated)
Lane 3: H-4-II-E
Lane 4: H-4-II-E (insulin treated)
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F0247 at 1/100 dilution.

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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客户使用该产品的1个实验数据

操作要点

蛋白定位：细胞膜; 内膜; 胞内体; 溶酶体。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
Phospho-IGF-I Receptor (Tyr 1135/1136) 本底表达低，建议先对其进行诱导刺激。

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
95 kDa

阳性对照	Hela (IGF-treated); H-4-II-E (insulin-treated)
阴性对照	Hela; H-4-II-E

样品处理数据示例

样品	处理情况
Hela	IGF
H-4-II-E	Insulin
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^*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org

样品	处理情况

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭（可选） 1. 电转移后，室温下用 TBS 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭（可选）

1. 电转移后，室温下用 TBS 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
仅当 Tyr1135/1136 或 Tyr1150/1151 位点发生磷酸化时，Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) 的蛋白水平。该抗体不与其他相关的酪氨酸磷酸化酪氨酸激酶发生交叉反应。

别名
Phospho IGFIR (Tyr1135/1136), Phospho IR (Tyr1150/1151)

Uniprot ID
P08069, P06213

克隆号
B2J21

背景
磷酸化 IGF-I 受体 β (Tyr1135/1136) 和胰岛素受体 β (Tyr1150/1151) 分别是 IGF-1 受体 (IGF-1R) 和胰岛素受体 (IR) 的 β 亚基上特定酪氨酸残基的磷酸化形式。这些受体是异四聚体跨膜酪氨酸激酶，由两个 α 亚基和两个 β 亚基组成。当受体与胰岛素或 IGF-1 等配体结合时，受体会在关键酪氨酸残基处发生自磷酸化，包括 IGF-1R 上的 Tyr1135/1136 和 IR 上的 Tyr1150/1151，它们是激酶域内关键酪氨酸簇的一部分。这种自磷酸化对于受体激活至关重要，使其能够磷酸化下游信号分子，从而启动与细胞生长、代谢和存活相关的各种细胞内信号级联。这些酪氨酸的磷酸化对于受体激酶活性的完全激活以及随后的细胞对胰岛素和 IGF-1 的反应是必不可少的。

背景

磷酸化 IGF-I 受体 β (Tyr1135/1136) 和胰岛素受体 β (Tyr1150/1151) 分别是 IGF-1 受体 (IGF-1R) 和胰岛素受体 (IR) 的 β 亚基上特定酪氨酸残基的磷酸化形式。这些受体是异四聚体跨膜酪氨酸激酶，由两个 α 亚基和两个 β 亚基组成。当受体与胰岛素或 IGF-1 等配体结合时，受体会在关键酪氨酸残基处发生自磷酸化，包括 IGF-1R 上的 Tyr1135/1136 和 IR 上的 Tyr1150/1151，它们是激酶域内关键酪氨酸簇的一部分。这种自磷酸化对于受体激活至关重要，使其能够磷酸化下游信号分子，从而启动与细胞生长、代谢和存活相关的各种细胞内信号级联。这些酪氨酸的磷酸化对于受体激酶活性的完全激活以及随后的细胞对胰岛素和 IGF-1 的反应是必不可少的。

参考文献
[1] Hernández-Sánchez C, et al. J Biol Chem. 1995 Dec 8;270(49):29176-81. [2] White MF, et al. J Biol Chem. 1988 Feb 25;263(6):2969-80.

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%