Phospho-Lamin A/C (Ser22) Rabbit mAb
目录号: F1962
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Lane 1: HeLa (Hydroxyurea, 4 mM, 20 hr)
Lane 2: HeLa (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr)
Lane 3: NIH/3T3 (Hydroxyurea, 4 mM, 20 hr)
Lane 4: NIH/3T3 (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr)
Lane 5: C6 (Hydroxyurea, 4 mM, 20 hr)
Lane 6: C6 (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr)
操作要点
蛋白定位：中间丝; 细胞核。
WB
建议使用 RIPA/Nuclear Lysis Buffer 制备裂解物。
WB
建议使用 RIPA/Nuclear Lysis Buffer 制备裂解物。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 69,78 kDa |
| 阳性对照 | Hela (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr); NIH/3T3 (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr); C6 (Paclitaxel, 100 nM, 20 hr) |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭（可选）
1. 电转移后，室温下用 TBS 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser22 磷酸化时 Phospho-Lamin A/C (Ser22) Rabbit mAb才 可检测内源性总 Phospho-Lamin A/C (Ser22) 的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Phospho Lamin A (Ser 22), Phospho Lamin A (Ser 22) |
| Uniprot ID |
|---|
| P02545 |
| 克隆号 |
|---|
| D12F9 |
| 背景 |
|---|
磷酸化层蛋白 A/C (Ser22) 是层蛋白 A/C 的磷酸化形式，层蛋白 A/C 是一种 V 型中间丝蛋白，由 LMNA 基因编码，构成内核膜下方核层的一部分。层蛋白 A/C 为三部分结构，由非螺旋 N 端头部结构域（包含 Ser22）、中央 α 螺旋卷曲杆状结构域和 C 端免疫球蛋白样折叠组成。Ser22 处的磷酸化由激酶（例如 CDK1/细胞周期蛋白 B、PKC 和 CK2）介导，发生在特定细胞周期阶段和细胞环境中。这种修饰调控核稳定性、细胞周期进程和通过 LINC 复合物的信号传导。磷酸化 Ser22 层蛋白 A/C 还参与调控离子通道（如 Nav1.5），并可通过结合增强子结构域充当转录激活因子。 Ser22 磷酸化增加会增强 Lamin A 的移动性，从而可能破坏核纤层，如在哈钦森-吉尔福德早衰综合征 (HGPS) 等疾病中观察到的那样。 |
| 参考文献 |
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