Phospho-TRAF2 (Ser11) Rabbit mAb

目录号: F1348

Lane 1: THP-1(TPA, 80 nM, overnight)
Lane 2: THP-1(TPA, 80 nM, overnight; transfect poly(dA:dT), 0.004 U/ml, 7 hrs)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
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100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
53 kDa

阳性对照	THP-1 ( poly (dA:dT), 0.004 U/ml, 7h )
阴性对照

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-TRAF2 (Ser11) Rabbit mAb 仅当 Ser11 位点磷酸化时才检测内源性总 TRAF2 的蛋白水平。

Uniprot ID
Q12933

克隆号
L10C17

背景
" TRAF2（TNF 受体相关因子 2）是 TRAF 家族中的关键接头蛋白，可调控来自 TNFR 超家族成员（包括 TNF-α 和 CD40）的信号。TRAF2 在丝氨酸 11 处的磷酸化由 TANK 结合激酶 1 (TBK1) 等激酶介导，对于下游 JNK 和 NF-κB 信号通路的激活至关重要。这种磷酸化促进 TRAF2 的细胞质易位，干扰其 RING 结构域与磷脂的相互作用，并且是完全激活 JNK 通路和 NF-κB 通路的第二阶段所必需的。在功能上，TRAF2 磷酸化增强 c-Jun 和 NF-κB 活性并赋予对应激诱导的细胞凋亡，使其成为癌症的潜在治疗靶点，其中改变的 TRAF2 信号传导会导致肿瘤发生和疾病进展。”"

背景

" TRAF2（TNF 受体相关因子 2）是 TRAF 家族中的关键接头蛋白，可调控来自 TNFR 超家族成员（包括 TNF-α 和 CD40）的信号。TRAF2 在丝氨酸 11 处的磷酸化由 TANK 结合激酶 1 (TBK1) 等激酶介导，对于下游 JNK 和 NF-κB 信号通路的激活至关重要。这种磷酸化促进 TRAF2 的细胞质易位，干扰其 RING 结构域与磷脂的相互作用，并且是完全激活 JNK 通路和 NF-κB 通路的第二阶段所必需的。在功能上，TRAF2 磷酸化增强 c-Jun 和 NF-κB 活性并赋予对应激诱导的细胞凋亡，使其成为癌症的潜在治疗靶点，其中改变的 TRAF2 信号传导会导致肿瘤发生和疾病进展。”"

参考文献
[1] Workman LM, et al. Mol Cell Biol. 2020 Apr 13;40(9):e00429-19. [2] Blackwell K, et al. Mol Cell Biol. 2009 Jan;29(2):303-14.

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