Phospho-TRAF2 (Ser11) Rabbit mAb
目录号: F1348
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Lane 1: THP-1(TPA, 80 nM, overnight)
Lane 2: THP-1(TPA, 80 nM, overnight; transfect poly(dA:dT), 0.004 U/ml, 7 hrs)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 53 kDa |
| 阳性对照 | THP-1 ( poly (dA:dT), 0.004 U/ml, 7h ) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| THP-1 | TPA (80 nM, overnight) | ||||
| THP-1 | TPA (80 nM, overnight)+ poly(dA:dT) (0.004 U/mL; 7r ), | ||||
| THP-1 | TPA (80 nM, overnight)+LPS (1μg/mL, 0.25/1 h) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
Phospho-TRAF2 (Ser11) Rabbit mAb 仅当 Ser11 位点磷酸化时才检测内源性总 TRAF2 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q12933 |
| 克隆号 |
|---|
| L10C17 |
| 背景 |
|---|
" TRAF2（TNF 受体相关因子 2）是 TRAF 家族中的关键接头蛋白，可调控来自 TNFR 超家族成员（包括 TNF-α 和 CD40）的信号。TRAF2 在丝氨酸 11 处的磷酸化由 TANK 结合激酶 1 (TBK1) 等激酶介导，对于下游 JNK 和 NF-κB 信号通路的激活至关重要。这种磷酸化促进 TRAF2 的细胞质易位，干扰其 RING 结构域与磷脂的相互作用，并且是完全激活 JNK 通路和 NF-κB 通路的第二阶段所必需的。在功能上，TRAF2 磷酸化增强 c-Jun 和 NF-κB 活性并赋予对应激诱导的细胞凋亡，使其成为癌症的潜在治疗靶点，其中改变的 TRAF2 信号传导会导致肿瘤发生和疾病进展。”" |
| 参考文献 |
|---|
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