PHOX2B C-terminal Rabbit mAb
目录号: F2798
抗体应用：
反应性：
操作要点
蛋白定位：细胞核。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IHC, IF |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
32 kDa
|
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。(建议曝光时长 60s 以上)。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
PHOX2B C-terminal Rabbit mAb 用于检测内源性 PHOX2B C-terminal 总的蛋白水平。 |
| 克隆号 |
|---|
| C18L18 |
| 背景 |
|---|
PHOX2B（paired-like homeobox 2B）是一种高度保守的、由314个氨基酸组成的同源盒转录因子，是自主神经系统及脑干呼吸调控中枢发育所必需的。在胚胎发育期间，该蛋白主要表达于控制自主和呼吸功能的神经区域。PHOX2B结构上由N端结构域、中心DNA结合同源域以及C端结构域组成，后者包含两个多丙氨酸（polyAla）重复序列，分别由9个和20个丙氨酸残基构成。C端在蛋白折叠、稳定性及转录活性中发挥重要作用。C端中20位点丙氨酸重复序列的错义扩增（+4至+13个丙氨酸，最常见为+5、+6、+7）会导致先天性中枢性通气不足综合征（CCHS），因其破坏了PHOX2B的结构与功能，干扰神经嵴发育与自主呼吸调控。此外，PHOX2B C端还可激活酪氨酸羟化酶（TH）转录，表明其对儿茶酚胺合成基因表达具有差异性调控作用，也可上调多巴胺β羟化酶（DBH）的表达。 |
| 参考文献 |
|---|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
