PI3 Kinase p110 δ Rabbit mAb
目录号: F2645
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Lane 1: SW620
Lane 2: HT1080
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 抗体类型 |
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| Rabbit |
| 反应性 |
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| Human , Mouse, Rat |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
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| 110 kDa |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Tris-HCL Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Tris-HCL Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Tris-HCL Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95–100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
16.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭（可选）
1. 电转移后，室温下用 TBS 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 18 min。
抗体孵育 1. 用 5% 的脱脂奶粉来配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 18 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
PI3 Kinase p110 δ Rabbit mAb 可检测内源性 PI3 Kinase p110 δ 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| PI 3 Kinase p110 delta,PI 3-kinase p110δ |
| 克隆号 |
|---|
| H17B15 |
| 背景 |
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磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 是一种酶，可磷酸化磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸 (PIP) 和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸 (PIP2) 以产生磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。该过程由生长因子和激素激活，从而调控细胞生长、细胞周期进程、细胞迁移和存活。酶 PTEN 通过将磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸去磷酸化来抵消该过程，研究表明，PTEN 功能的丧失会导致各种人类癌症中 PI3K 通路的组成性激活。 PI3K 由催化亚基 (p110) 和调控亚基组成，催化亚基有不同的亚型，包括 p110α、p110β、p110γ 和 p110δ。p85α 和 p85β 调控亚基与 p110α、p110β 和 p110δ 相互作用。虽然在许多人类癌症中经常观察到编码 p110α 亚型的 PIK3CA 基因的功能获得性突变，但在编码 p110β 或 p110δ 的基因中没有发现体细胞突变。与广泛表达的 p110α 和 p110β 不同，p110δ 主要存在于白细胞中，这使得 p110δ 通路成为免疫疾病研究的重点。 p110δ 异构体在某些血液系统恶性肿瘤的发展和进展中起着关键作用，使用 p110δ 选择性抑制因子和小鼠模型中的基因失活研究强调了其参与细胞分化、生长、存活、运动和与肌醇磷酸酶 PTEN 相互作用等过程。 |
| 参考文献 |
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