Rig-I Rabbit mAb
目录号: F0360
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Lane 1: Raw264.7
Lane 2: CHO
Lane 3: THP-1
Lane 4: THP-1 (LPS,1 ug/ml,overnight)
Lane 5: RAW 264.7
Lane 6: RAW 264.7 (LPS,1 ug/ml,overnight)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞连接; 细胞膜; 细胞突起; 细胞质; 细胞骨架; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Hamster, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 102 Kda |
| 阳性对照 | THP-1 (LPS, 1 ug/ml, overnight); RAW 264.7 (LPS, 1 ug/ml, overnight) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| THP-1 | LPS (1 ug/mL, overnight) | ||||
| RAW264.7 | LPS (1 ug/mL, overnight) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤：
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Rig-I Rabbit mAb 用于检测内源性 Rig-I 总的蛋白水平。 |
| 别名 |
|---|
| Rig-I,RIG-I/DDX58 |
| Uniprot ID |
|---|
| O95786 |
| 克隆号 |
|---|
| L12P1 |
| 背景 |
|---|
RIG-I 样受体 (RIG-I-like receptors, RLR) 对于检测病毒 RNA、启动先天抗病毒反应至关重要。 RIG-I 特异性感知双链 RNA (dsRNA)，该双链 RNA 在受感染的细胞中积累，但在未受感染的细胞中不存在。 RIG-I 通过 5'-三磷酸末端结合 RNA，并在其 N 末端具有两个半胱天冬酶募集结构域 (CARD) 样基序。 三种 DExD/H 盒解旋酶，称为视黄酸诱导基因 I (RIG-I)、黑色素瘤分化相关抗原 5 (MDA5) 和遗传学和生理学实验室 2 (LGP2)，在其解旋酶结构域中表现出显着的一级结构保守性 。 |
| 参考文献 |
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