RIP2 Rabbit mAb
目录号: F1262
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Lane 1: Hela
Lane 2: 293T
Lane 3: THP-1
Lane 4: SR
Lane 5: raji
Lane 6: jurkat
Lane 7: MOLT-4
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 内质网; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 62 kDa |
| 阳性对照 | Raji; THP-1; SR; Hela; 293T |
|---|---|
| 阴性对照 | Jurkat; MOLT-4 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 120min)。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
RIP2 Rabbit mAb识别内源性RIP2总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| O43353 |
| 克隆号 |
|---|
| M23E23 |
| 背景 |
|---|
受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 2 (RIP2) 是一种衔接蛋白，也是受体信号通路中的重要环节。它特异性地与 TRAF1、TRAF5 和 TRAF6 结合，并被募集到 TNFR-1 和 CD40 受体信号复合物中。RIP2 具有激酶活性，在 Ser/Thr 残基上自我磷酸化。这种 61 kDa 蛋白激酶是 TNFR-1 和 CD40 信号复合物的组成部分。RIP2 对 NOD1 和 NOD2 蛋白的信号传播至关重要，它包含与 Ser/Thr 激酶同源的 N 端结构域和 C 端 Caspase 活化和募集结构域 (CARD)，可介导 Caspase 死亡蛋白酶的募集。NOD1、NOD2 和 RIP2 中的功能丧失突变与克罗恩病和狼疮等自身免疫性疾病有关。此外， RIP2 参与 NOD1/2 独立的信号传导事件，包括自噬和神经元激活。RIP2–CARD 细丝结构有助于解释 NOD1、NOD2 和 RIP2 中的疾病相关突变。 |
| 参考文献 |
|---|
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