RIP2 Rabbit mAb

目录号: F1262

Lane 1: Hela
Lane 2: 293T
Lane 3: THP-1
Lane 4: SR
Lane 5: raji
Lane 6: jurkat
Lane 7: MOLT-4

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 内质网; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
62 kDa

阳性对照	Raji; THP-1; SR; Hela; 293T
阴性对照	Jurkat; MOLT-4

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 120min)。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 120min)。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
RIP2 Rabbit mAb识别内源性RIP2总蛋白水平。

Uniprot ID
O43353

克隆号
M23E23

背景
受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 2 (RIP2) 是一种衔接蛋白，也是受体信号通路中的重要环节。它特异性地与 TRAF1、TRAF5 和 TRAF6 结合，并被募集到 TNFR-1 和 CD40 受体信号复合物中。RIP2 具有激酶活性，在 Ser/Thr 残基上自我磷酸化。这种 61 kDa 蛋白激酶是 TNFR-1 和 CD40 信号复合物的组成部分。RIP2 对 NOD1 和 NOD2 蛋白的信号传播至关重要，它包含与 Ser/Thr 激酶同源的 N 端结构域和 C 端 Caspase 活化和募集结构域 (CARD)，可介导 Caspase 死亡蛋白酶的募集。NOD1、NOD2 和 RIP2 中的功能丧失突变与克罗恩病和狼疮等自身免疫性疾病有关。此外， RIP2 参与 NOD1/2 独立的信号传导事件，包括自噬和神经元激活。RIP2–CARD 细丝结构有助于解释 NOD1、NOD2 和 RIP2 中的疾病相关突变。

背景

受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 2 (RIP2) 是一种衔接蛋白，也是受体信号通路中的重要环节。它特异性地与 TRAF1、TRAF5 和 TRAF6 结合，并被募集到 TNFR-1 和 CD40 受体信号复合物中。RIP2 具有激酶活性，在 Ser/Thr 残基上自我磷酸化。这种 61 kDa 蛋白激酶是 TNFR-1 和 CD40 信号复合物的组成部分。RIP2 对 NOD1 和 NOD2 蛋白的信号传播至关重要，它包含与 Ser/Thr 激酶同源的 N 端结构域和 C 端 Caspase 活化和募集结构域 (CARD)，可介导 Caspase 死亡蛋白酶的募集。NOD1、NOD2 和 RIP2 中的功能丧失突变与克罗恩病和狼疮等自身免疫性疾病有关。此外， RIP2 参与 NOD1/2 独立的信号传导事件，包括自噬和神经元激活。RIP2–CARD 细丝结构有助于解释 NOD1、NOD2 和 RIP2 中的疾病相关突变。

参考文献
[1] Gong Q, et al. Nat Commun. 2018 Nov 26;9(1):4993. [2] McCarthy JV, et al. J Biol Chem. 1998 Jul 3;273(27):16968-75.

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