STAG2 Rabbit mAb
目录号: F2647
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Lane 1: Hela
Lane 2: NIH/3T3
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质; 细胞骨架; 微管; 着丝粒; 细胞核; 线粒体
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP, IF, ChIP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 141 kDa |
| 阳性对照 | Hela; NIH/3T3 |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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| IF |
|---|
实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
STAG2 Rabbit mAb 可检测内源性 STAG2 总的蛋白水平。该抗体不与其他 STAG 蛋白（包括 STAG1 和 STAG3）发生交叉反应。 |
| 别名 |
|---|
| SA2,STAG2 |
| Uniprot ID |
|---|
| P63167 |
| 克隆号 |
|---|
| L5L7 |
| 背景 |
|---|
STAG2 是黏连蛋白复合体的核心成分，该复合体由 SMC1A、SMC3 和 RAD21 组成，形成环绕 DNA 双螺旋的环状结构。STAG2 和 STAG1 是互斥的亚基，对着丝粒和端粒处的姐妹染色单体黏连至关重要。除了染色体分离之外，STAG2 还参与染色质组织、转录调控、DNA 复制和修复。它与 SGO1 相互作用，在有丝分裂期间保护黏连蛋白免受 WAPL 介导的解离。此外，STAG2 通过与 CTCF 相互作用在基因表达调控中发挥关键作用，CTCF 有助于组织间期染色质并充当转录绝缘体。STAG2 基因位于染色体 Xq25 上，横跨 35 个外显子。它的调控通过与其他黏连蛋白复合蛋白和 CTCF 等因子的相互作用进行，确保染色质结构和黏连性正常。 |
| 参考文献 |
|---|
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