TLR4 mAb
目录号: F2122
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Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human stomach tissue with F2122 at 1/600 dilution.
操作要点
蛋白定位：细胞膜; 细胞突起; 胞内体; 内膜。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| IHC, IF, FCM |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Pig |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃ |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 120-140 kDa |
| 阳性对照 | Human colorectal carcinoma; Human small intestine; Mouse small intestine; Human skin; Rat small intestine; Rat salivary gland; THP1; Jurkat |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
|---|
实验步骤： 标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
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| IHC |
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实验步骤： 脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
TLR4 mAb 可检测内源性总 TLR4 的蛋白水平。 |
| 别名 |
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| TLR4,Toll-like Receptor 4 |
| Uniprot ID |
|---|
| O00206 |
| 克隆号 |
|---|
| J3D3 |
| 背景 |
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Toll 样受体 4 (TLR4) 是模式识别受体 (PRR) 家族的一部分，该家族是高度保守的受体，可检测病原体相关分子模式 (PAMP)。这使得它们对于最初的感染防御至关重要。TLR4 存在于造血细胞和非造血细胞的细胞表面，包括内皮细胞、心肌细胞和中枢神经系统 (CNS) 内的细胞。它以识别革兰氏阴性细菌脂多糖 (LPS) 而闻名，但也与组织损伤期间产生的内源性分子结合。因此，TLR4 是一个关键受体，感染性和非感染性刺激在此汇聚，从而导致促炎反应。TLR4 介导的炎症，无论是由外部还是内部配体引发的，都在各种急性和慢性疾病中发挥重要作用，是炎症反应的关键中间环节。 |
| 参考文献 |
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