Anti-Perforin Mouse Antibody [P20D17]

目录号: F2444

抗体应用：反应性：Human

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F2444 at 1:100 dilution.,
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F2444 at 1:100 dilution.,

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
IHC1:100

抗体应用
IHC

反应性
Human

抗体类型
Mouse

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
70 kDa

阳性对照	Human spleen tissue
阴性对照

实验方法

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Anti-Perforin Mouse Antibody [P20D17] 可检测内源性 Perforin 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，内体，溶酶体，内膜系统，细胞外环境

Uniprot ID
P14222

克隆号
P20D17

别名
PFP, PRF1, Perforin-1, P1, Cytolysin, Lymphocyte pore-forming protein

背景
穿孔素是一种成孔糖蛋白，主要由细胞毒性淋巴细胞（例如自然杀伤 (NK) 细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL)）产生。它属于 MACPF（膜攻击复合物/穿孔素）家族，由对其功能至关重要的结构域组成：负责成孔的 MACPF 结构域、介导膜结合的钙依赖性 C2 结构域以及提供结构灵活性的 EGF 样结构域。穿孔素一旦分泌到细胞毒性细胞与靶细胞（病毒感染或恶性）之间形成的免疫突触中，就会寡聚化并插入靶细胞膜，形成直径约为 20 nm 的跨膜孔。这些孔允许促凋亡的颗粒酶进入细胞溶胶，从而引发靶细胞凋亡。R298 等关键残基对于寡聚化和成孔至关重要。穿孔素介导的孔形成对于免疫监视和清除异常细胞至关重要，穿孔素的缺陷或突变会导致严重的免疫缺陷症，例如家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症 (FHL)。穿孔素还在免疫调节中发挥作用，并与各种疾病中细胞毒功能破坏或失调有关。

背景

穿孔素是一种成孔糖蛋白，主要由细胞毒性淋巴细胞（例如自然杀伤 (NK) 细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL)）产生。它属于 MACPF（膜攻击复合物/穿孔素）家族，由对其功能至关重要的结构域组成：负责成孔的 MACPF 结构域、介导膜结合的钙依赖性 C2 结构域以及提供结构灵活性的 EGF 样结构域。穿孔素一旦分泌到细胞毒性细胞与靶细胞（病毒感染或恶性）之间形成的免疫突触中，就会寡聚化并插入靶细胞膜，形成直径约为 20 nm 的跨膜孔。这些孔允许促凋亡的颗粒酶进入细胞溶胶，从而引发靶细胞凋亡。R298 等关键残基对于寡聚化和成孔至关重要。穿孔素介导的孔形成对于免疫监视和清除异常细胞至关重要，穿孔素的缺陷或突变会导致严重的免疫缺陷症，例如家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症 (FHL)。穿孔素还在免疫调节中发挥作用，并与各种疾病中细胞毒功能破坏或失调有关。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20536554/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35148176/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%