Anti-RANK Mouse Antibody [E4N12]

目录号: F2425

抗体应用：反应性：Human, Mouse

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2425 at 1:50 dilution.,
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2425 at 1:50 dilution.,

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
IP1:500-1:1000 IHC1:200

抗体应用
IP, IHC

反应性
Human, Mouse

抗体类型
Mouse

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

阳性对照	Human skin; Human t cell lymphoma; RAW cell
阴性对照

实验方法

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Anti-RANK Mouse Antibody [E4N12] 可检测内源性 RANK 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，内膜系统

Uniprot ID
Q9Y6Q6

克隆号
E4N12

别名
CD265, RANK, TNFRSF11A, Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A, Osteoclast differentiation factor receptor, Receptor activator of NF-KB, ODFR

背景
RANK（核因子 κB 受体激活剂）是一种由 616 个氨基酸组成的 I 型跨膜糖蛋白，包含 28 个氨基酸的信号肽、184 个氨基酸的胞外结构域、21 个氨基酸的跨膜区和 383 个氨基酸的胞内结构域，含有三个功能性胞质基序——PFQEP(369–373)、PVQEET(559–564) 和 PVQEQG(604–609)——可介导与 TRAF6 等衔接蛋白的相互作用，从而激活 NF-κB、MAPK（JNK、ERK、p38）和 Akt/PKB 通路。 RANK由TNFRSF11A基因编码，在破骨细胞前体、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、活化T细胞、自然杀伤细胞、胸腺髓质上皮细胞、乳腺上皮细胞和某些上皮干细胞群中表达。功能上，RANK调节破骨细胞在骨重塑中的分化、活化和存活；支持淋巴结器官发生、胸腺上皮发育和免疫耐受；维持上皮干细胞稳态；介导孕酮驱动的乳腺上皮增殖；并且，当其失调时，会促进肿瘤发生、转移和癌症干细胞扩增。

背景

RANK（核因子 κB 受体激活剂）是一种由 616 个氨基酸组成的 I 型跨膜糖蛋白，包含 28 个氨基酸的信号肽、184 个氨基酸的胞外结构域、21 个氨基酸的跨膜区和 383 个氨基酸的胞内结构域，含有三个功能性胞质基序——PFQEP(369–373)、PVQEET(559–564) 和 PVQEQG(604–609)——可介导与 TRAF6 等衔接蛋白的相互作用，从而激活 NF-κB、MAPK（JNK、ERK、p38）和 Akt/PKB 通路。 RANK由TNFRSF11A基因编码，在破骨细胞前体、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、活化T细胞、自然杀伤细胞、胸腺髓质上皮细胞、乳腺上皮细胞和某些上皮干细胞群中表达。功能上，RANK调节破骨细胞在骨重塑中的分化、活化和存活；支持淋巴结器官发生、胸腺上皮发育和免疫耐受；维持上皮干细胞稳态；介导孕酮驱动的乳腺上皮增殖；并且，当其失调时，会促进肿瘤发生、转移和癌症干细胞扩增。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33552088/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26749530/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%