CHD4 Rabbit mAb

目录号: F1472

Lane 1: NCCIT
Lane 2: F9
Lane 3: C6
Lane 4: COS-7

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质; 细胞骨架; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IF1:400 CHIP1:50

抗体应用
WB, IF, ChIP

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
260 kDa

阳性对照	NCCIT; F9; C6; COS-7; 293T; K562
阴性对照

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

IF
实验步骤：标本制备 1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。 2. 室温固定细胞 15 分钟。 3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。 4. 继续进行免疫染色。免疫染色 1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。 2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。 3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。 4. 4°C 孵育过夜。 5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。 7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。 9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

实验步骤：

标本制备

1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。

注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

2. 室温固定细胞 15 分钟。

3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

4. 继续进行免疫染色。

免疫染色

1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。

2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。

3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。

4. 4°C 孵育过夜。

5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。

7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。

9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
CHD4 Rabbit mAb 可检测内源性总 CHD4 的蛋白水平。

Uniprot ID
Q14839

克隆号
M3D10

背景
Chromodomain-解旋酶-DNA 结合 (CHD) 蛋白是一个由九种蛋白质组成的家族，存在于各种生物体中，分为三个亚家族：亚家族 I（CHD1 和 CHD2）、亚家族 II（CHD3 和 CHD4）和亚家族 III（CHD5、CHD6、CHD7、CHD8 和 CHD9）。 CHD 蛋白通常存在于大型多蛋白复合物中，它们在转录激活或抑制中的作用受到其他相关蛋白的影响。所有 CHD 蛋白都具有共同的结构，在氨基末端具有两个串联的染色质结构域、一个 SWI/SNF 相关的 ATPase 结构域和一个羧基末端 DNA 结合结构域。染色质结构域使 CHD 蛋白能够与组蛋白上的甲基化赖氨酸残基结合，促进与特定染色质区域的相互作用，而 ATPase 结构域则利用 ATP 水解产生的能量来重塑染色质结构。CHD3 (Mi2-α) 和 CHD4 (Mi2-β) 是核小体重塑和组蛋白去乙酰化酶 (NuRD) 复合物的关键成分，该复合物还包括 HDAC1、HDAC2、RBAP48、RBAP46、MTA1、MTA2、MTA3 和 MBD3，起转录抑制的作用。

背景

Chromodomain-解旋酶-DNA 结合 (CHD) 蛋白是一个由九种蛋白质组成的家族，存在于各种生物体中，分为三个亚家族：亚家族 I（CHD1 和 CHD2）、亚家族 II（CHD3 和 CHD4）和亚家族 III（CHD5、CHD6、CHD7、CHD8 和 CHD9）。 CHD 蛋白通常存在于大型多蛋白复合物中，它们在转录激活或抑制中的作用受到其他相关蛋白的影响。所有 CHD 蛋白都具有共同的结构，在氨基末端具有两个串联的染色质结构域、一个 SWI/SNF 相关的 ATPase 结构域和一个羧基末端 DNA 结合结构域。染色质结构域使 CHD 蛋白能够与组蛋白上的甲基化赖氨酸残基结合，促进与特定染色质区域的相互作用，而 ATPase 结构域则利用 ATP 水解产生的能量来重塑染色质结构。CHD3 (Mi2-α) 和 CHD4 (Mi2-β) 是核小体重塑和组蛋白去乙酰化酶 (NuRD) 复合物的关键成分，该复合物还包括 HDAC1、HDAC2、RBAP48、RBAP46、MTA1、MTA2、MTA3 和 MBD3，起转录抑制的作用。

参考文献
[1] Hall JA, et al. Biochem Cell Biol. 2007 Aug;85(4):463-76. [2] Xue Y, et al. Mol Cell. 1998 Dec;2(6):851-61.

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