Cleaved Notch1 (Val1744) Rabbit mAb

目录号: F0277

    • Lane 1: Molt4
      Lane 2: Jurkat
      Lane 3: MCF7
    1/
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    操作要点

    WB
    蛋白定位
    细胞膜; 内膜; 细胞核
    建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

    使用信息

    稀释比例
    1: 1000
    1:200
    1:200
    抗体应用
    WB, IP, ChIP
    抗体类型
    Rabbit
    反应性
    Human, Mouse, Rat
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
    储存条件(自收到货起)
    –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    110 kDa
    阳性对照 Molt4; Jurkat; CUTLL1
    阴性对照 MCF-7; CUTLL1 (γ-secretase inhibitor (1μM) for 3 days)

    实验方法

    WB
    实验步骤:
     
    电泳分离
    1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳;
    2.电源调80V,30分钟。然后电源调(110V~150V),观察Marker,待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流不要太大,电流太大(超过150mA)会导致温度上升,影响跑胶结果。如无法避免大电流,可以对电泳槽冰浴来降温。)
     
    转膜
    1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
    2.用甲醇活化PVDF膜1分钟,用转移缓冲液冲洗;
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
    4.电源200mA,100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。(注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节,电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好,但需要保持电转槽在低温的环境中,避免胶的融化。推荐不要超过250mA,120分钟。)
     
    封闭(可选)
    1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟;
    2.在封闭液中孵育膜1小时,室温;
    3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
     
     抗体孵育
    1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液(一抗稀释比1: 1000),4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
    2.用TBST洗膜3次,每次5分钟;
    3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时;
    4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
    显色
    1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
    2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性

    Cleaved Notch1 (Val1744) Rabbit mAb 用于检测内源性 Cleaved Notch1 (Val1744) 总的蛋白水平。

    Uniprot ID
    P46531
    克隆号
    H7M6
    背景

    Notch 蛋白是形成异二聚体蛋白的跨膜受体,包含一个大的胞外配体结合域、一个单程跨膜域和一个称为 Notch 胞内域 (NICD) 的较小胞质亚基。 当与 Delta-Serrate-Lag2 (DSL) 家族的配体相互作用时,异二聚体会发生解离,然后进行蛋白水解并释放 NICD。 然后 NICD 移动到细胞核,在那里启动目标基因的转录。 在小鼠 Notch1 中,NICD 激活是通过 Gly1743 和 Val1744(对应于人 Notch1 中的 Gly1753 和 Val1754)之间的裂解发生的。 Notch1 参与调节细胞分化、细胞命运决定和侧向抑制的细胞内信号传导通路。 该基因的突变与多种健康状况有关,包括血癌、异常心血管钙化、主动脉瓣疾病和人类 T 细胞急性淋巴细胞白血病。

    参考文献

    技术支持

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