Jagged1 Rabbit mAb
目录号: F0634
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜；内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 180 kDa |
| 阳性对照 | HepG2; LNCaP |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
Jagged1 Rabbit mAb 可检测内源性总 Jagged1 的蛋白水平。该抗体不与 Jagged2 发生交叉反应。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P78504 |
| 克隆号 |
|---|
| A13E14 |
| 背景 |
|---|
Jagged1 (JAG1) 是一种细胞表面配体，主要参与 Notch 信号通路，它通过与 NOTCH 受体相互作用激活基因转录，导致蛋白水解切割和 NOTCH 细胞内结构域的核易位。JAG1 突变与 Alagille 综合征等疾病以及法洛四联症有关。JAG1 位于 20p12.2 染色体上，横跨 36 kb，有 26 个外显子，编码含 1218 个氨基酸的蛋白质。蛋白质结构包括一个小的胞内结构域、一个跨膜结构域和一个较大的胞外区域，胞外区域具有信号肽、DSL 结构域、16 个 EGF 样重复序列和一个富含半胱氨酸的区域，这些区域对于其在细胞分化、增殖和细胞间通讯中的调控功能至关重要。 |
| 参考文献 |
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