p53 (acetyl K370) Rabbit mAb

目录号: F2018

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
蛋白定位
细胞质; 细胞骨架; 内质网; 线粒体; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:100 IF1:500 FCM1:200-1:400

抗体应用
WB, IP, IF, FCM

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse, Rat

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
43 kDa 53 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

阳性对照	NIH/3T3; HepG2; C6
阴性对照

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 90min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

IF
实验步骤：标本制备 1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。 2. 室温固定细胞 15 分钟。 3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。 4. 继续进行免疫染色。免疫染色 1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。 2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。 3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。 4. 4°C 孵育过夜。 5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。 7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。 8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。 9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

实验步骤：

标本制备

1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。

注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

2. 室温固定细胞 15 分钟。

3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

4. 继续进行免疫染色。

免疫染色

1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。

2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。

3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。

4. 4°C 孵育过夜。

5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。

7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。

9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
p53 (acetyl K370) Rabbit mAb可检测内源性p53 (acetyl K370)总的蛋白水平。

Uniprot ID
P04637

克隆号
L18F8

背景
转录因子p53通常被称为“基因组的守护者”，是基因毒性应激条件下细胞命运的关键调控器。在正常情况下，p53保持非活性状态，并通过E3泛素连接酶（如MDM2/HDM2、Pirh2、COP1和ARF-BP1）介导的持续降解维持在低水平。响应各种应激信号，p53 稳定性和转录活性得到增强，从而诱导大量下游靶基因。激活 p53 依赖性信号通路可导致多种细胞结果，包括生长停滞和细胞凋亡，具体取决于细胞类型和应激性质。p53 的乙酰化发生在其 C 末端调控域和/或 DNA 结合域内的多个赖氨酸残基上，该过程由组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 介导，例如 p300/CREB 结合蛋白 (CBP)、p300/CBP 相关因子和 Tip60。这种翻译后修饰通过增加 p53 的 DNA 结合亲和力并促进将 p300 等共激活因子募集到 p53 反应基因的启动子区域来增强 p53 的转录活性。 C 末端结构域中的特定赖氨酸残基（包括 K370、K372、K373、K381、K382 和 K386）被乙酰化，从而增强了 p53 的 DNA 结合能力并增强了其转录功能。

背景

转录因子p53通常被称为“基因组的守护者”，是基因毒性应激条件下细胞命运的关键调控器。在正常情况下，p53保持非活性状态，并通过E3泛素连接酶（如MDM2/HDM2、Pirh2、COP1和ARF-BP1）介导的持续降解维持在低水平。响应各种应激信号，p53 稳定性和转录活性得到增强，从而诱导大量下游靶基因。激活 p53 依赖性信号通路可导致多种细胞结果，包括生长停滞和细胞凋亡，具体取决于细胞类型和应激性质。p53 的乙酰化发生在其 C 末端调控域和/或 DNA 结合域内的多个赖氨酸残基上，该过程由组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 介导，例如 p300/CREB 结合蛋白 (CBP)、p300/CBP 相关因子和 Tip60。这种翻译后修饰通过增加 p53 的 DNA 结合亲和力并促进将 p300 等共激活因子募集到 p53 反应基因的启动子区域来增强 p53 的转录活性。 C 末端结构域中的特定赖氨酸残基（包括 K370、K372、K373、K381、K382 和 K386）被乙酰化，从而增强了 p53 的 DNA 结合能力并增强了其转录功能。

参考文献
[1] Song L, et al. Oncogene. 2011 Mar 17;30(11):1360-71.

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