Phospho-NF-κB p105 (Ser 932) Rabbit mAb
目录号: F0400
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Lane 1: HeLa
Lane 2: HeLa (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min)
Lane 3: NIH/3T3
Lane 4: NIH/3T3 (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min)
操作要点
WB
蛋白定位
细胞质；细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 120 kDa |
| 阳性对照 | HeLa (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min); NIH/3T3 (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min); Vero (TNF-α ,20 ng/ml, 5s); Vero (TNF-α ,20 ng/ml, 15s) |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| Hela | TNF-α (20 ng/mL, 5 min) + Calyculin A (50 nM, 5 min) | ||||
| NIH/3T3 | TNF-α (20 ng/mL, 5 min) + Calyculin A (50 nM, 5 min) | ||||
| Vero | TNF-α (20 ng/mL, 5 s) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
仅当 Ser932 位点发生磷酸化时，Phospho-NF-B p105 (Ser932) Rabbit mAb 可检测内源性总 Phospho-NF-B p105 (Ser932) 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P19838 |
| 克隆号 |
|---|
| H7P1 |
| 背景 |
|---|
NF-κB（核因子 κB）转录因子在调控免疫和炎症反应中起着重要作用。NF-κB（核因子 κB）/Rel 转录因子家族的两个成员 NF-κB1 和 NF-κB2 分别作为前体蛋白 NF-κB1 p105 和 NF-κB2 p100 产生。在 TNFα 刺激或 LPS 激活 TLR4 后，NF-κB p105 在 Ser932 位点被 IKK 复合物磷酸化。PEST 区域的这种磷酸化会募集 SCFβTrCP E3 连接酶，导致 p105 泛素化和蛋白酶体降解。p105 降解会释放 TPL-2，从而激活 MEK/ERK 信号通路。因此，NF-κB p105 在 Ser932 处的磷酸化可调控 NF-κB 活化和 MAP 激酶信号传导，通过控制淋巴细胞和巨噬细胞的功能来协调免疫和炎症反应。 |
| 参考文献 |
|---|
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