PI3 Kinase p101 Rabbit mAb

目录号: F1398

Lane 1: RAW264.7
Lane 2: Jurkat

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

抗体类型
Rabbit

反应性
Human, Mouse

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
101 kda

阳性对照	Raw264.7
阴性对照

操作要点

WB
蛋白定位
细胞膜; 细胞质; 内膜; 细胞核
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。

实验方法

WB
Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 120min)。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 120min)。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
PI3 Kinase p101 Rabbit mAb识别内源性的PI3 Kinase p101总蛋白。

Uniprot ID
Q8WYR1

克隆号
H23D19

背景
磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 通过磷酸化磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸 (PIP) 和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸 (PIP2) 来催化磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的产生。这种由生长因子和激素引发的磷酸化事件可调节细胞生长、细胞周期进入、细胞迁移和细胞存活。 PI3K 由催化亚基 (p110) 和调节亚基组成。催化亚基的不同亚型包括 p110α、p110β、p110γ 和 p110δ。与 p110α、p110β 和 p110δ 相关的调节亚基是 p85α 和 p85β。p101 调节亚基与异三聚体 G 蛋白释放的 Gβγ 结合，并将 p110γ 催化亚基募集到质膜，这对于 GPCR 诱导的 PI3Kγ 活性至关重要。

背景

磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 通过磷酸化磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸 (PIP) 和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸 (PIP2) 来催化磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的产生。这种由生长因子和激素引发的磷酸化事件可调节细胞生长、细胞周期进入、细胞迁移和细胞存活。 PI3K 由催化亚基 (p110) 和调节亚基组成。催化亚基的不同亚型包括 p110α、p110β、p110γ 和 p110δ。与 p110α、p110β 和 p110δ 相关的调节亚基是 p85α 和 p85β。p101 调节亚基与异三聚体 G 蛋白释放的 Gβγ 结合，并将 p110γ 催化亚基募集到质膜，这对于 GPCR 诱导的 PI3Kγ 活性至关重要。

参考文献
[1] Cantley LC, et al. Science. 2002 May 31;296(5573):1655-7. [2] Voigt P, et al. J Biol Chem. 2005 Feb 11;280(6):5121-7.

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