PLD2 Rabbit mAb
目录号: F1493
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Lane 1: Hela
Lane 2: A549
Lane 3: HUVEC
操作要点
WB
蛋白定位
细胞膜; 内膜
建议使用 RIPA/NP-40 裂解。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 预测分子量 |
|---|
| 95 kDa |
| 阳性对照 | human cortex; HeLa; A549; HUVEC |
|---|---|
| 阴性对照 |
样品处理数据示例
| 样品 | 处理情况 | ||||
| 293T | Tansfection (hPLD2-Myc) | ||||
| 点击查看更多样品数据 | |||||
*该蛋白在不同的人源细胞、组织内的表达量预测请参考：http://www.proteinatlas.org
实验方法
| WB |
|---|
Western Blotting
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。 |
生物描述
| 特异性 |
|---|
PLD2 Rabbit mAb 可检测内源性总 PLD2 的蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| O14939 |
| 克隆号 |
|---|
| B7K12 |
| 背景 |
|---|
磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 D (PLD) 催化磷脂酰胆碱 (PC) 水解生成胆碱和磷脂酸 (PA)，其中 PA 是第二信使二酰甘油 (DAG) 的前体。PLD 有两种主要同工型：PLD1 和 PLD2。PLD2 在基础条件下主要定位于质膜，在那里它与脂筏中的受体结合；而 PLD1 位于核周膜中，并在细胞刺激后转移到质膜。 PLD2 的激活由蛋白激酶 C (PKC) 和受体（例如 EGFR、PDGFR）和非受体酪氨酸激酶（例如 Src、JAK3）介导，而 PLD1 由 PKC、酪蛋白激酶 II 和小 GTP 酶（例如 ARF 和 RHO）激活。与 PLD1 相比，PLD2 表现出更高的基础活性，并且不仅作为磷脂酶发挥作用，而且作为鸟嘌呤核苷酸交换因子 (GEF) 发挥作用。PLD2 活性通过复杂的磷酸化和去磷酸化途径进行调控，主要作用于酪氨酸残基，涉及与 S6K、Grb2、Sos、WASp 和 Rac2 等蛋白质的相互作用。PLD2 异构体在各种癌症中高度表达，包括结直肠癌和乳腺癌，并且还充当小 GTP 酶 Rac2 的 GEF，与其磷脂酶功能无关。 |
| 参考文献 |
|---|
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