PF-477736

别名: PF-736, PF-00477736

PF-477736 (PF-736, PF-00477736)是一种有效的,选择性的,ATP竞争性Chk1抑制剂,无细胞试验中Ki为0.49 nM,也抑制VEGFR2, Aurora-A, FGFR3, Flt3, Fms (CSF1R), Ret和Yes。作用于Chk1比作用于Chk2选择性高100倍左右。

PF-477736 Chemical Structure

PF-477736 Chemical Structure

CAS: 952021-60-2

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10mM (1mL in DMSO) 2047.21 现货
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细胞实验数据示例

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生物活性

产品描述 PF-477736 (PF-736, PF-00477736)是一种有效的,选择性的,ATP竞争性Chk1抑制剂,无细胞试验中Ki为0.49 nM,也抑制VEGFR2, Aurora-A, FGFR3, Flt3, Fms (CSF1R), Ret和Yes。作用于Chk1比作用于Chk2选择性高100倍左右。
靶点
Chk1 [1]
(Cell-free assay)
VEGFR2 [1]
(Cell-free assay)
Fms [1]
(Cell-free assay)
YES [1]
(Cell-free assay)
Chk2 [1]
(Cell-free assay)
0.49 nM(Ki) 8 nM(Ki) 10 nM(Ki) 14 nM(Ki) 47 nM(Ki)
体外研究(In Vitro)
体外研究活性

PF 477736(128 nM)作用于CA46 和 HeLa细胞,废除Camptothecin诱导的DNA损伤检查点,这种作用具有剂量依赖性。PF 477736作用于HT29细胞,有效废除诱导的S期停滞,使凋亡细胞群相应增加。PF 477736(540 nM)作用于HT29细胞,增强诱导的细胞毒性,这种作用具有时间和剂量依赖性。在MTT法检测中,PF 477736增强一组化疗剂作用于广谱p53缺失的人类癌细胞系的抑制生长活性。PF 477736(360 nM)作用于停滞的细胞,诱导H2AX磷酸化强度剧增,DNA损伤位点附近产生大量的γ-H2AX分子。[1] PF 477736(0.5 nM)作用于HL-60细胞,在Curcumin存在时,选择性抑制p73和p53磷酸化。[2] PF 477736(360 nM)作用于COLO205细胞,抑制诱导的组蛋白 H3 (Ser10) 和 Cdc25C (Ser216)磷酸化,且增强凋亡。[3] PF 477736(250 nM)与MK-1775联用作用于OVCAR-5细胞,具有显著的协同细胞毒性。PF 477736(250 nM)与MK-1775 联用作用于OVCAR-5细胞,导致DNA含量介于2N和4N之间的细胞累积。PF 477736(250 nM)与MK-1775联用作用于OVCAR-5细胞,DNA复制结束前产生过早的有丝分裂,受损的DNA导致细胞凋亡。[4]

激酶实验 结合实验
在96孔板中30°C下进行实验20分钟,孔中为0.1 mL实验缓冲液,包含50 mM TRIS pH 7.5, 0.4 M NaCl, 4 mM PEP, 0.15 mM NADH, 28 单位乳酸脱氢酶/mL, 16 单位丙酮酸激酶/mL, 3 mM DTT, 0.125 mM Syntide-2, 0.15 mM ATP和25 mM MgCl2。加入1 nM CHK1激酶域开始实验。PF 477736存在时,通过测量初始速率,而测定对CHK1的抑制活性。通过酶动力学和Excel软件分析数据,拟合竞争性抑制的动力学模型,获得Ki值。测评PF 477736的激酶选择性。
细胞实验 细胞系 HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 和 K562 细胞
浓度 ~1 μM
孵育时间 96 小时
方法

IC50 实验,测量PF 477736作用于p53缺陷的人类癌细胞系的抗增殖效果。每种细胞系接种在96孔实验板中,孔中含完全培养基,细胞呈指数生长,进行贴壁生长16小时。每个实验板添加连续稀释的PF 477736和合适的对照组。细胞与药物温育96小时。温育后,每孔加入在完全培养基稀释的MTT工作储存液,细胞温育4小时。离心后,去除上清液,每孔加入DMSO加入,在SpectraMax酶标仪上在540nm处进行读数。

实验图片 检测方法 检测指标 实验图片 PMID
Western blot p-53 / p-p53 / p21 / MDM2 p-ATM / γ-H2AX 31362335
Growth inhibition assay Cell viability 29167438
Immunofluorescence p-p53 31362335
体内研究(In Vivo)
体内研究活性

PF 477736按4 mg/kg剂量处理大鼠,终末半衰期(T1/2)为2.9小时, AUC为5.72 μg×hr/mL,CLp为11.8 mL/min/kg。PF 477736按最大耐受剂量处理携带Colo205移植瘤的小鼠模型,增强抗肿瘤活性,这种作用具有剂量依赖性。PF 477736(12 mg/kg)处理携带Colo205移植瘤的小鼠模型,诱导组蛋白 H3 (Ser10)磷酸化和磷酸化组蛋白 H2AX增加。[1] PF 477736(15 mg/kg)腹腔注射处理COLO205和MDA-MB-231,移植瘤模型,增强诱导的肿瘤生长抑制和肿瘤生长延迟。[3] PF 477736 (10 mg/kg ,腹腔注射,每天一次) 与MK-1775 (30 mg/kg,口服处理,每天两次) 联用作用于携带OVCAR-5移植瘤的小鼠,增强抑制肿瘤生长的效果。 [4]

动物实验 Animal Models 携带Colo205移植瘤的小鼠模型
Dosages 40 mg/kg
Administration 静脉注射
NCT Number Recruitment Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT00437203 Terminated
Neoplasms
Pfizer
December 2006 Phase 1

化学信息&溶解度

分子量 419.48 分子式

C22H25N7O2

CAS号 952021-60-2 SDF Download PF-477736 SDF
Smiles CN1C=C(C=N1)C2=C3C=NNC(=O)C4=C3C(=CC(=C4)NC(=O)C(C5CCCCC5)N)N2
储存条件(自收到货起)

体外溶解度
批次:

DMSO : 84 mg/mL ( (200.24 mM) ;DMSO吸湿会降低化合物溶解度,请使用新开封DMSO)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

摩尔浓度计算器

体内溶解度
批次:

现配现用,请按从左到右的顺序依次添加,澄清后再加入下一溶剂

动物体内配方计算器

实验计算

摩尔浓度计算器

质量 浓度 体积 分子量

动物体内配方计算器(澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)

mg/kg g μL

第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

计算结果:

工作液浓度: mg/ml;

DMSO母液配制方法: mg 药物溶于μL DMSO溶液(母液浓度mg/mL,:如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请先联系Selleck);

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入μL ddH2O,混匀澄清。

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL Corn oil,混匀澄清。

注意:1. 首先保证母液是澄清的;
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。

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常见问题及建议解决方法

问题 1:
Can you advise the vehicle suggested for S2904: 2% DMSO/40% PEG 300 at 5mg/ml, is it a suspension or clear solution? I wanted to know how to dissolve this compound for an i.p. injection in mice

回答:
S2904 can dissolve in 2% DMSO/40% PEG 300 at 5mg/ml as a clear solution. If you are going to use this kind of vehicle, please dissolve the compound in DMSO clearly first, then add PEG300, then water.

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