RAF709
RAF709是有效的B/C RAF抑制剂，对C-RAF和B-RAF的IC50值分别为0.4 nM和1.5 nM。它具有高选择性，在浓度为1 μM时，对BRAF, BRAFV600E 和 CRAF的靶向结合率大于99%，而对DDR1、DDR2、FRK和FDGFRβ的脱靶效应非常少。
RAF709 Chemical Structure
CAS: 1628838-42-5
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生物活性
| 产品描述 | RAF709是有效的B/C RAF抑制剂，对C-RAF和B-RAF的IC50值分别为0.4 nM和1.5 nM。它具有高选择性，在浓度为1 μM时，对BRAF, BRAFV600E 和 CRAF的靶向结合率大于99%，而对DDR1、DDR2、FRK和FDGFRβ的脱靶效应非常少。 | ||||||
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| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | 应用快速稀释法检测RAF709的解离速率常数，其离解动力学过程缓慢，T1/2 > 6.5 h。在Calu-6细胞中，检测pMEK和MEK对RAF709的剂量反应，其EC50分别为0.02和0.1 μM，RAF709抑制其细胞增殖的EC50为0.95 μM。RAF709可稳定BRAF−CRAF二聚体，EC50为0.8 μM。RAF709具有高选择性，在所检测的456种激酶中，1 μM RAF709的靶向效应大于99%（BRAF, BRAFV600E和CRAF）[1]。RAF709对RAF寡聚物和二聚体具有相等的活性作用。在体外生化检测中，RAF709对BRAF, BRAFV600E和CRAF具有有效的抑制活性，IC50值在0.3-1.5 nM间，在HCT116细胞中，诱导和稳定B/CRAF异源二聚化，但抑制了MEK和ERK磷酸化，抑制RAF二聚体活性。RAF709选择性地抑制了癌基因信号和携有BRAF, NRAS或KRAS突变的肿瘤细胞的增殖[2]。 |
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| 激酶实验 | CRAF kinase assay | |||
| 应用10 nM 显性负突变MEK1蛋白底物（携有K97R突变）、3 μM ATP和10 pM CRAF CRAF Y340E/Y341E开展CRAF激酶实验。reaction buffer包含50 mM Tris pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.05% BSA, 50 mM NaCl, 0.01% Tween-20 和 1 mM DTT。室温下在白色384孔浅口培养板中进行反应，反应体积为10 μL，反应时间为40分钟，每孔加入5 μLquench solution (50 mM Tris pH 7.5, 50 mM EDTA)以终止反应。向反应体系中加入5 μL 显色试剂（50 mM Tris pH 7.5, 0.01% Tween-20, 1:1000稀释的anti-phospho MEK1/2 S217/S221抗体溶液, 0.01 mg/mL each of AlphaScreen Protein A-coated acceptor beads和streptavidin-coated donor bead），室温孵育过夜。利用EnVision plate reader进行检测。在化合物抑制实验中，化合物的检测浓度范围为25 μM-1.74 × 10−6 μM。DMSO终浓度为0.5%。在加入底物开始反应前，将化合物和CRAF置于一起共同孵育30分钟。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | HCT116细胞 | ||
| 浓度 | 0.1, 1, 10 μM | |||
| 孵育时间 | 1小时 | |||
| 方法 | 用一定浓度的DMSO或RAF709对HCT116细胞进行处理，处理1小时。通过免疫沉淀BRAF或CRAF检测BRAF/CRAF的二聚化，然后WB分析BRAF和CRAF的表达。细胞溶解产物中的pMER和pERK也通过WB分析检测。 |
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| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 | 在携有KRAS突变的移植瘤模型中，RAF709耐受性良好。在不同物种的血浆中37℃孵育3小时，RAF709具有一定的血浆稳定性（在大鼠、小鼠、狗和人类血浆中分别剩余85%、82%、95%和101%）。在各个不同的物种中，血浆蛋白结合率为98%。在药代动力学实验中，RAF709在小鼠和狗中具有中等清除率（分别为35 mL/min/kg和14 mL/min/kg），在大鼠中具有高清除率（50 mL/min/kg）。在小鼠、狗和大鼠中Cmax分别为1 μM、0.5 μM和0.5 μM；在小鼠、大鼠和狗中的口服生物利用度分别为68%、24%和48%。在Calu-6移植瘤小鼠模型中，RAF709的处理将发挥其剂量依赖性的抗肿瘤活性[1]。 |
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|---|---|---|
| 动物实验 | Animal Models | Calu-6 model (tumor bearing mice) |
| Dosages | 10, 30 或 200 mg/kg. | |
| Administration | 口服途径 | |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 542.55 | 分子式 | C28H29F3N4O4 |
| CAS号 | 1628838-42-5 | SDF | -- |
| Smiles | CC1=C(C=C(C=N1)NC(=O)C2=CC(=CC=C2)C(F)(F)F)C3=CC(=C(N=C3)OC4CCOCC4)N5CCOCC5 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 100 mg/mL ( (184.31 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Ethanol : 100 mg/mL (184.31 mM) Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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